Resumo

Carbapenemases NDM têm sido reportadas em muitos países, principalmente em Enterobacteriaceae. O gene blaNDM-1 já havia sido detectado em Enterobacter hormaechei na cidade de Porto Alegre, porém não há relatos de Escherichia coli produtora de blaNDM-1 na cidade do Rio de Janeiro. A localização dos genes NDM em plasmídios conjugativos facilita sua disseminação entre espécies bacterianas distintas. Foi realizada revisão do prontuário médico visando caracterizar uso de antimicrobianos e viagens no Brasil ou ao exterior. DNA plasmidial foi extraído através de lise alcalina para transformação por eletroporação em E. coli TOP 10. Os transformantes foram selecionados em ágar LB contendo 4 µg/mL de ceftazidima. A presença do gene blaNDM-1 foi confirmada através de PCR utilizando-se os oligonucleotídeos NDM-L-bleo-FW 5’TGGGTCGAGGTCAGGATAGG e NDM-R-Aba-125-RV 5’GCTTTTGAAACTGTCGCACCT. Identificação do grupo de incompatibilidade plasmidial foi realizada através de PCR descrito por Carattoli e colaboradores. Sequenciador Ion Torrent (Life Technologies) foi utilizado para o sequenciamento integral do plasmídio. Ensaio de conjugação foi realizado utilizando-se a cepa E. coli J53, resistente à azida sódica, como receptora. A cepa Escherichia coli E0083033-2 foi obtida de cultura de swab retal, em criança atendida em hospital do Rio de Janeiro, em Agosto/2013. A paciente tinha histórico de internação prévia para tratamento de leucemia linfoblástica aguda. Foram obtidos transformantes albergando plasmídio de aproximadamente 69 Kpb contendo o gene NDM-1 flanqueado por um gene de resistência à bleomicina (bleMBL) na porção 3’ e por um elemento de inserção ISAba125 truncado na porção 5’, devido à inserção de um elemento IS3000. O plasmídio contém um integron de classe I truncado na região promotora dos cassetes, o que explica o fenótipo de sensibilidade à ciprofloxacina, rifampicina e cloranfenicol, a despeito da presença dos genes aacA4-cr, aar3 e catB3. O plasmídio tem um arcabouço característico do grupo IncX com um operon pil que codifica um aparato completo de conjugação, sendo a transferência do plasmídio entre cepas de E. coli realizada numa frequência de 6,0x10^-1. Não houve amplificação utilizando-se a PCR multiplex preconizada por Carattoli et al., o que torna limitado seu uso para detecção dos grupos plasmidiais. Este é o primeiro relato da detecção de blaNDM-1 em plasmídio conjugativo IncX no Brasil.