Resumo

A Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) apresenta como aspecto marcante de sua patogenicidade a formação de biofilme. Este estudo propôs determinar o impacto de biofilme na concentração inibitória mínima a antimicrobianos em biofilme (MBIC) de amostras de EAEC forte em fracas produtoras de biofilme formado em sistema peg lid. Foram utilizadas amostras de EAEC sensíveis para os antimicrobianos ciprofloxacina, gentamicina, tobramicina e tetraciclina. Para a produção de biofilme em sistema peg lid, colônias em caldo LB foram incubadas a 37^oC por 18-24 hs, adicionadas à microplaca com DMEM 4% glicose, tampada com peg lid e incubada sob agitação (110 rpm) a 37^oC por 20-24 hs. A peg lid com biofilme foi transferida para uma nova microplaca com diluições dobradas dos antimicrobianos em CAMHB por 18-20 hs 37^oC, seguido por recuperação do biofilme por sonicação (10 min, alta frequência) para uma nova placa com CAMHB isento de antimicrobiano. A DO650 foi medida no tempo 0 (zero) e após incubação por 6 hs a 37^oC. O biofilme formado foi considerado adequado se a diferença da média da DO₆₅₀ (x̄ 6 hs – x̄ 0 hs) dos controles positivos fosse ≥ 0,05; a MBIC foi determinada como a menor concentração do antimicrobiano que resultou em diferença de DO₆₅₀ ≤10% da média das leituras dos controles positivos. Dentre os antimicrobianos testados contra a EAEC em biofilme de 24 h, maior atividade foi observada para Ciprofloxacina, com todas as amostras se mantendo sensíveis (MBIC ≤1 µg). As amostras de EAEC fraca produtoras de biofilme foram susceptíveis em biofilme à Tobramicina e Gentamicina. Porém, a Tobramicina foi menos eficiente nas amostras forte produtoras de biofilme do que a Gentamicina, com isolados passando a ser intermediários ou resistentes. A tetraciclina foi a que apresentou menor eficiência para as EAEC fracas produtoras de biofilme pois todas passaram a resistentes quando em biofilme (MBIC≥ 16 µg). A MBIC passou a ser até >32x> MIC (formas plantônicas) e resistência maior foi observada para as amostras classificadas como forte produtoras de biofilme, sugerindo que a matriz polissacarídica exerceria um bloqueio maior à penetração do antimicrobiano. O uso de tetraciclina levaria à falência no tratamento, embora fosse sensível pela MIC. Determinação da susceptibilidade a antimicrobianos em sistema peg lid é mais eficiente para inferir a resistência de microrganismos formadores de biofilme.