Resumo

Introdução: Métodos alternativos para o controle de micro-organimos tem sido fortemente estudados. Produtos de origem vegetal tem demonstrado efetiva ação antimicrobiana, podendo auxiliar na eliminação de leveduras oportunistas como C. albicans. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a atividade antifúngica do extrato de alecrim (Rosmarinus officinalis) sobre biofilme de C. albicans. Material e Métodos:A ação do extrato (200 mg/mL) foi verificada em culturas planctônicas de C. albicans por microdiluição em caldo, segundo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) – norma M27-A2. Posteriormente, a atividade antibiofilme do extrato foi verificada pelo método MTT que verificou a viabilidade celular do biofilme após exposição ao extrato. Para formação do biofilme, a cepa ATCC 18804 foi cultivada em ágar Sabouraud-dextrose (37ºC/24 h) e após em caldo YNB (37ºC/24 h). Em solução fisiológica estéril (NaCl 0,9%) foi ajustado o inóculo para 10⁷ UFC/mL. Após, foram adicionados em placas de microtitulação 200 μL/poço desta suspensão para período de pré-adesão do biofilme, realizado sob incubação (37°C/90 min) e agitação (75 rpm). O sobrenadante foi descartado e adicionado caldo YNB para desenvolvimento do biofilme. A placa foi novamente submetida à incubação (37°C/75 rpm) por 48 h e a cada 24 h o caldo foi substituído. O grupo tratado (n=10) foi exposto por 5 min ao extrato de alecrim (200 mg/mL) e o grupo controle (n=10) permaneceu com solução salina. Os poços foram lavados com solução fisiológica e foram acrescentados 200 μL/poço de solução de MTT (0,5 mg/mL PBS). Após incubação (37°C/1 h), sob proteção da luz, foi acrescentado DMSO para solubilizar os produtos gerados após metabolização do MTT pela levedura. A placa foi incubada (37°C/10 min) e à agitação por mais 10 min. A leitura da densidade óptica (DO) foi feita em espectrofotômetro de microplacas (λ=570 nm) e os valores foram convertidos em percentual de viabilidade celular em comparação com o grupo controle. A análise estatística foi realizada com ANOVA e Tukey Test (p≤0,05). ResultadosFoi observada redução significativa (p<0,05) da viabilidade do biofilme de 36,59 ± 12,81% após exposição ao extrato de alecrim, devido o grupo tratado ter apresentado em média DO de 0,357 ± 0,072 e o grupo controle 0,563 ± 0,082. Conclusão: o extrato de alecrim foi efetivo para o controle in vitro do biofilme de C. albicans com significativa redução da viabilidade celular do biofilme.