Resumo

Introdução: A febre maculosa é uma doença infecciosa e apresenta um amplo espectro clínico. Causada pela bactéria Rickettsia rickettsii e transmitida pelo carrapato, possui proteínas autotransportadoras (AT) expostas na superfície celular denominadas de proteína de membrana externa (Omp). Dentre essas, a OmpA é um antígeno imunodominante e exclusiva do grupo da febre maculosa (GFM). O nosso estudo visa identificar epítopos da Omp de R. rickettsii, cepa Brazil, que contribuirá em um diagnóstico peptídico mais específico e sensível para o GFM, pois o diagnóstico padrão apresenta reação cruzada com rickettsias de outros grupos. Materiais e Métodos: A antigenicidade do conjunto de Omp da R. rickettsii foram analisadas pelo servidor Vaxijen v 2.0 usando parâmetro padrão (Limiar= 0.4, ACC out put). A reação cruzada com outras proteínas de outros microorganismos foi avaliada pelo Blastp e o Clustal W foi realizado com outras OmpAs do GFM. A seleção das regiões expostas na superfície da Omp foi realizada usando o servidor de domínio transmembrana, TMMOD, e o índice de hidrofilicidade pelo método de WOOP & HOOD. Do segmento selecionado obteve-se uma biblioteca de peptídeos com o software Multipep, contendo 14 resíduos de extensão, e sobreposição de 9 resíduos. A partir da biblioteca com a técnica F-moc foram obtidos peptídeos sintéticos e ligados covalentemente a uma membrana celulósica através do “Cellu Spot”. A identificação dos spots positivos foi realizada com soros de pacientes (n=20) com GFM e anti-IgM/IgG conjugado com fosfatase alcalina. A Omp foi reanalisada pelo servidor Bepipred para confirmar a sua especificidade. Discussão dos resultados: A análise pelo Vaxijen resultou na H6PGA4 com um score de 0.6784. O blast não apresenta reação cruzada e Clustal W uma identidade de ≅ 96% com a OmpA do GFM. A predição de epítopos B lineares foram 50. A região hidrofílica e exposta selecionada para análise imunológica mostrou ser acessível ao sistema imune. A reatividade da biblioteca de 84 peptídeos sintéticos com anticorpos IgM e IgG estão sendo revalidada. Resultados experimentais preliminares identificaram um total de 42 epitopos B lineares. Embora o número total do predito seja próximo ao teórico, as sequências dos epítopos são discordantes. Conclusão prévia: A proteína H6PGA4 da rickettsia é uma provável OmpA, pertencente a família AT e exclusiva do GFM. Possui cerca de 40 epitopos B lineares dos quais 8 foram selecionados para serem empregados em futuros testes diagnósticos específicos. Instituição fomento: FIOCRUZ