Resumo

Recentemente, vários métodos moleculares têm sido utilizados para identificar isolados de Candida e delinear subgrupos dentro das espécies. Os microssatélites, devido ao seu alto nível de polimorfismo encontrado em seus loci, têm se apresentado como marcadores moleculares úteis para o estudo de microevolução de isolados clínicos de Candida spp. Para avaliar o poder discriminatório de microssatélites na análise da diversidade genética de espécies de Candida foi realizada tipagem genética com microssatélite-(GTG)5. Um total de 115 isolados de Candida obtidos de espécimes de urina e secreção vaginal de pacientes internados em um hospital de Alagoas em 2011 foram analisados. Inicialmente, os isolados foram identificados por CHROMagar Candida e confirmados por PCR com iniciadores espécie-específicos, para o qual o DNA foi extraído pelo método de fenol/clorofórmio. Posteriormente, foram realizadas análises de tipagem com microssatélite-GTG5 com ciclos de amplificação programados para um ciclo de desnaturação inicial de 5 minutos a 94°C, seguidos de 40 ciclos de desnaturação a 94°C por 15 segundos, anelamento a 55°C por 45 segundos, extensão a 72°C por 90 segundos e extensão final a 72°C por 6 minutos. Os fragmentos de DNA foram submetidos à separação por eletroforese a 7,5 V/cm em gel de agarose a 1,3% em tampão TBE 0,5X por 100 minutos, posteriormente corados com brometo de etídio (0,5 mg/mL), visualizados em transiluminador e fotografados em sistema Vilber Lourmat modelo Doc-Print II. Os padrões das bandas obtidos foram analisados pelo software NTSYS PC 2.1 para obtenção do dendrograma, utilizando o coeficiente de similaridade de Jacard e agrupamento pelo critério UPGMA. Dos 77 isolados clínicos de Candida albicans, foram identificados 37 perfis genéticos, 10 perfis foram identificados em 16 isolados de Candida tropicalis, 5 perfis em 14 isolados de Candida glabrata e 5 em 8 isolados de Candida parapsilosis, confirmando que existe alta variabilidade intraespecífica nas espécie de Candida. Além disso, foram identificados padrões genéticos característicos de cada espécie, permitindo sua utilização para identificação independente de alterações morfológicas, de crescimento e bioquímicas, além de variações genotípicas dentro das espécies.