Resumo

Casos de resistência por micro-organismos patogênicos aos antimicrobianos surgem constantemente, com isso, é importante buscar métodos alternativos para seu controle. Produtos naturais tem demonstrado efetiva ação antimicrobiana. O presente estudo avaliou in vitro a atividade antibiofilme do extrato de alecrim sobre P. aeruginosa. Inicialmente, foi verificada a ação antibacteriana do extrato (200 mg/mL) por microdiluição em caldo, segundo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) – norma M7-A6. Após, a atividade antibiofilme do extrato foi verificada pelo método MTT, que analisou o percentual de viabilidade celular do biofilme. Para formação do biofilme, a cepa-padrão ATCC 15442 foi cultivada em ágar BHI (37ºC/24 h) e após em caldo BHI (37ºC/24 h). O inóculo foi ajustado a 10⁷ UFC/mL em solução fisiológica estéril (NaCl 0,9%) e adicionado em placas de microtitulação 200 μL/poço desta solução. Passados 90 min de incubação sob agitação (37°C – 75 rpm), o sobrenadante foi descartado e adicionado caldo BHI para crescimento do biofilme nos poços. Em seguida, a placa foi novamente incubada (37°C/48 h – 75 rpm), e a cada 24 h o caldo foi substituído. O grupo tratado (n=10) foi exposto por 5 min ao extrato de alecrim (200 mg/mL) e logo lavado com solução fisiológica para descartar células bacterianas não aderidas ao biofilme, no grupo controle (n=10) foi adicionado solução fisiológica estéril. Em seguida, a viabilidade celular do biofilme foi analisada acrescentando 200 μL/poço de solução de MTT (0,5 mg/mL PBS). Após incubação (37°C/1 h) sob proteção da luz, foi acrescentado DMSO para solubilização dos produtos gerados após metabolização do MTT, por 10 min a placa ficou sob incubação (37°C) e sob agitação por mais 10 min. Em espectrofotômetro de microplacas (λ=570 nm) foi feita leitura da densidade óptica (DO) dos poços e os valores foram convertidos em percentual de viabilidade celular em comparação com o grupo controle. A análise estatística foi realizada com ANOVA e Teste de Tukey (p≤0,05). O extrato de alecrim reduziu significativamente a viabilidade celular do biofilme de P. aeruginosa em 35,66 ± 13,25% (p<0,05), uma vez que, as DO foram 1,563 ± 0,220, para o grupo controle, e 1,005 ± 0,207, para o grupo tratado. Desta forma, pode-se concluir que o extrato de alecrim apresentou atividade antibiofilme proporcionando significativa redução in vitro do biofilme de P. aeruginosa.