Resumo

Corynebacterium diphtheriae é um bacilo de grande importância mundial por ser o agente etiológico tanto de quadros de difteria clássica, quanto de infecções sistêmicas. Classicamente este organismo é descrito como um patógeno extracelular, entretanto existem evidências de que este microrganismo possa ser internalizado por células epiteliais. Dentre as estruturas de superfície de C. diphtheriae que possam estar relacionadas aos processos de aderência e invasão, destaca-se o complexo protéico não fimbrial de 67-72kDa denominado 67-72p . Recentemente, estudos com análises proteômicas comparativas in silico e in vitro, permitiram a anotação dessa proteína supracitada como DIP0733 e foi sugerida sua implicação no processo invasivo e apoptótico de células epiteliais. Dessa forma, o objetivo deste trabalho é comprovar se o gene que codifica para a proteína DIP0733 está realmente relacionado com o processo de aderência e invasão da bactéria à célula hospedeira e qual o seu papel no processo de virulência e patogenicidade. Inicialmente clonamos um fragmento interno do gene de interesse em um vetor suicida e a sequência nucleotídica deste foi verificada através do sequenciamento pelo método de Sanger. Posteriormente foi feita eletro transformação nas linhagens ATCC 27010, ATCC 27012 e CDCE 8392 de C. diphtheriae mitis para obtenção das linhagens mutantes por nocaute gênico através do evento de recombinação homóloga simples. Obtivemos as linhagens mutantes com o fenótipo de Canamicina resistentes. A confirmação da inserção do plasmídeo suicida foi realizada por PCR utilizando diversas combinações de iniciadores. Testes in vivo e in vitro estão em andamento, utilizando ensaios de mortalidade e colonização em C. elegans e em camundongos e ensaios de aderência e internalização em células Hep-2, através da comparação do comportamento das linhagens mutantes obtidas com as linhagens selvagens. Através destes experimentos esperamos elucidar o papel deste gene no processo de virulência e de patogenicidade deste microrganismo.