Resumo

Estima-se que existam aproximadamente 107 espécies de microrganismos no planeta, representando uma grande diversidade genética, desempenhando importantes funções no equilíbrio ecológico, o que permite inferir sobre o potencial de aplicação dos mesmos em diferentes abordagens biotecnológicas. Enzimas, de maneira geral, passaram a ocupar papéis importantes em produtos e processos industriais, substituindo o uso de catalisadores químicos, acarretando na diminuição de tempo, energia e geração de rejeitos industriais. As proteases são enzimas bioquimicamente diversas, tendo como característica e atratividade a fácil manipulação e versatilidade de aplicação em diferentes áreas (saúde, industrial, ambiental). Neste sentido, a metagenômica apresenta-se como ferramenta de acesso ao potencial proteolítico de microrganismos tidos como não cultivados, permitindo à obtenção de enzimas com características únicas. O presente estudo tem por meta a realização de triagens proteolíticas de uma biblioteca metagenômica composta por 31.000 clones fosmidiais provenientes da microbiota de amostras de petróleo coletadas a partir de reservatórios Bacia Potiguar brasileira. A atividade proteolítica foi investigada a partir da inoculação dos clones em ágar Skim Milk, segundo metodologia descrita por Rossi et al. (2007). Hits positivos foram detectados através da geração de halos de hidrólise da caseína do meio de cultura pela enzima secretada pelo clone fosmidial. Até o presente momento, foram triados 3744 clones, do quais 17 apresentaram-se como hits positivos. Sabendo-se que a metodologia de hidrólise de caseína pode promover a perda de resultados potencialmente positivos, quanto à atividade proteolítica, optamos por investigar os clones tidos como hits negativos, através da metodologia proposta por Oliveira et al. (2012). O método baseia-se na detecção de proteases microbianas a partir da clivagem de uma sonda peptídica denominada como Abz-GXXXXXQ-EDDnp, havendo a liberação de fluorescência quando a linhagem apresenta atividade proteolítica. Dessa forma, 15 clones foram escolhidos ao acaso e avaliados sobre a sonda peptídica. Cinco clones apresentaram atividade proteolítica, evidenciando o potencial da biblioteca metagenômica em análise como fonte de proteases. Assim, todos os clones da biblioteca serão avaliados sobre a sonda peptídica fluorescente, sendo que aqueles que apresentarem atividade proteolítica seguirão a estudos para a quantificação e caracterização enzimática.