Resumo

Biocatalizadores são amplamente usados pela indústria em processos de transformação. A demanda por enzimas novas com propriedades específicas é alta e vem crescendo nos últimos anos. A bioprospecção de novos biocatalizadores é uma forma de eventualmente atender a essa demanda. A busca por novas enzimas em diferentes fontes tem potencial em resultar no encontro de novas enzimas potencialmente mais eficientes que as disponíveis no mercado. Com a finalidade de encontrar novos produtos de interesse biotecnológico, realizamos o pirossequenciamento do DNA total obtido do microcosmo da microbiota endofítica de frutos de Elaeis guineensis Jacq (Dendê). Para a preparação do microcosmo, foram selecionados frutos com o epicarpo integro. Após desinfecção e remoção do epicarpo, o mesocarpo foi fragmentado. Inoculou-se 1g mesocarpo em um meio de cultura contendo Caldo Triptona de Soja e emulsão Tween 80 mais óleo de dendê. Após três dias, 1 ml da cultura foi filtrada em uma membrana de 14 µm. As células do filtrado obtido foram precipitadas e submetidas à lise enzimática e o DNA total foi extraído por precipitação, purificado e usado para construir uma biblioteca de fragmentos que foi sequenciada numa única rodada (full slide) na plataforma 454 GS FLX Titanium (Roche®). O sequenciamento gerou um total de 903.319 leituras, o que equivale a 357.066.347 nucleotídeos de informação. A maior parte das leituras geradas apresentou o tamanho acima de 400 bp (mediana de 427bp) e qualidade PHRED acima de 20 (média de 30,79). As leituras foram usadas para montagem de novo dos contigs usando o pacote Newbler. Foram montados 18.100 contigs, onde foram mapeados 86.02% das leituras geradas. O maior contig apresentou o tamanho de 227.821 bp e o N50 obtido foi de 5.305 bp. Todos os contigs foram alinhados através do algoritmo blastx contra a base de dados do Protein Data Bank (PDB), que contém apenas proteínas validadas experimentalmente. Foram selecionados contigs que alinharam a sequencias de proteínas de interesse biotecnológico. As sequências codificadoras (CDSs) contidas nesses contigs foram preditas e foram selecionadas CDSs que codificam proteínas com alta similaridade, mas menor identidade às proteínas de interesse, sugerindo que sejam novas proteínas a serem validadas experimentalmente através de clonagem e expressão heteróloga. Foram encontrados os seguintes potencialmente novos biocatalizadores diferentes: lipases (n=9); amilases (n=11); xilanase (n=1); pectinase (n=1); quitinase (n=3) e mais duas CDSs que codificam potencialmente novas proteínas fluorescentes. A microbiota endofítica do dendê é potencialmente fonte de uma ampla gama de produtos de interesse biotecnológico.