Resumo

Introducción: Los polifosfatos inorgánicos (poliP) son esenciales en el metabolismo bacteriano, y afectan importantes procesos como la virulencia y la comunicación celular. En Pseudomonas aeruginosa, la enzima polifosfato quinasa (PPK1) cataliza reversiblemente la síntesis de poliP a partir de ATP, mientras que la PPK2 sintetiza principalmente GTP a partir de poliP. Con el fin de evaluar la virulencia de los mutantes de los genes ppk1 y ppk2 de P. aeruginosa PAO1 utilizamos el pez cebra como modelo animal. Metodología: Para esto, se realizaron curvas de sobrevivencia de Kaplan-Meier de las larvas ante distintas bacterias crecidas en medios con alto y bajo fosfato inorgánico (Pi). Se utilizaron como control las cepas de P. aeruginosa PAO1 silvestre, el aislado clínico PA14 y la cepa no virulenta E. coli DH5α. De forma complementaria se estudió la producción de algunos de los factores de virulencia de P. aeruginosa, como el exopolosicárido pel que forma biopelículas en la interfase aire-líquido, mediante el ensayo de Rojo Congo, y la producción del sideróforo pioverdina y el pigmento tóxico piocianina mediante espectroscopia. Resultados: La cepa más virulenta fue PA14, que mostró similar comportamiento en ambos medios. A diferencia de la cepa PAO1 silvestre que sólo es letal en condiciones de bajo Pi, la cepa mutante PAO1 ppk2 es letal en ambos medios. Contrariamente, la cepa mutante PAO1 ppk1 es menos letal en las dos condiciones ensayadas. En relación a los factores de virulencia, se determinó una menor producción de exopolisacárido pel en ambas cepas mutantes al compararlas con la cepa PAO1 silvestre, una mayor producción de piocianina en el mutante ppk2 en carencia y exceso de fosfato, aumento compartido por el mutante ppk1 en carencia de fosfato, pero una marcada disminución de pioverdina en este mutante en ambas condiciones, contrario a lo observado en el mutante ppk2 que presentó un aumento en la producción de este sideróforo en comparación con la cepa silvestre en carencia de fosfato. Conclusión: Mutaciones en el gen ppk1, pero no en el ppk2, generan una disminución en la producción de dos de los factores de virulencia evaluados, y una atenuación en la virulencia de la cepa mutante en un modelo animal de infección.