Resumo

Os avanços recentes das técnicas na área genética molecular, uma ênfase especial tem sido dada à análise genômica a fim de caracterizar a diversidade bacteriana. Nesse caso, a maioria dos métodos utilizados compreende a aplicação de PCR (polymerase chain reaction) estudando marcadores moleculares, dentre eles se destaca o gene 16S rDNA, devido sua elevada conservação intraespecífica. A bactéria Z. mobilis tem atraído considerável interesse devido ao seu rápido metabolismo e eficiente habilidade em produzir etanol a partir de açúcares simples. Para analisar a variabilidade genética em 7 linhagens de Zymomonas mobilis UFPEDA foram analisadas as sequências e os perfis de restrição do gene 16S rDNA. As linhagens foram cultivadas em meio SSDL por 24 horas para extração de DNA. As reações de PCR foram realizadas com iniciadores e condições específicas para a amplificação do gene 16S rDNA. Os fragmentos obtidos foram sequenciados e analisados com os programas BLASTn e MultAlin. Os perfis de restrição teórico das endonucleases de restrição Hae III, NdeII e StuI foram gerados a partir do DistinctiEnz. As seqüências do gene 16S rDNA foram obtidas após a amplificação do DNA genômico purificado das 7 linhagens de Z. mobilis UFPEDA. O tamanho do fragmento amplificado obtido variou conforme a linhagem de 666 pb a 1306 pb. O alinhamento múltiplo das linhagens de Z. mobilis UFPEDA realizado com o programa MultAlin revelou regiões gênicas com elevada conservação como a região entre o nucleotídeo 92 e 390, onde são encontrados poucos gaps e algumas mutações de bases. As sequências obtidas tiveram diferentes graus de semelhanças com linhagens padrão de coleções internacionais: Z. mobilis subsp. mobilis ZM4, Z. mobilis subsp. pomaceae ATCC 29192 e com Z. mobilis subsp. mobilis LMG 445. Outros autores concluíram que a enzima Hae III originou três perfis de restrição específico para cada subspécie. Os nossos resultados mostram perfis de restrição diferentes aos propostos por esses autores, não nos possibilitando usar esse método para subtipar as linhagens UFPEDA. Baseados nestes resultados, outras metodologias devem ser empregadas para maior caracterização de variabilidade gênica destas linhagens, possibilitando um melhor conhecimento de sua diversidade e relacionando essa variabilidade com os padrões fisiológicos.