Resumo

Em estudos da tuberculose em bovinos, apesar de vários métodos indiretos de diagnóstico, a cultura bacteriológica de seu agente Mycobacterium bovis permanece o método padrão ouro para a confirmação da infecção. Uma variedade de protocolos de pré-tratamento e processamento, além de inibidores de contaminantes são empregados para facilitar a recuperação de micobactérias. No entanto, alguns descontaminantes podem apresentar efeito tóxico e afetar a viabilidade micobacteriana, interferindo no resultado do cultivo, particularmente em amostras paucibacilares. O objetivo deste estudo foi comparar quatro métodos de descontaminação para o isolamento primário de M. bovis, a partir de amostras teciduais com ou sem lesão sugestiva, provenientes de bovinos e búfalos com suspeita de tuberculose. Um rebanho leiteiro misto composto por 77 bovinos mestiços e 21 búfalos, localizado em Cachoeiras de Macacu, RJ, foi avaliado pelo Teste Cervical Comparativo (TCC). Os animais reativos (17 vacas e três búfalos) e inconclusivos (sete vacas) foram abatidos e amostras de pulmão, linfonodos mediastínico e brônquico foram colhidas e submetidas à cultura, usando quatro métodos descontaminantes; NaOH 4% (Método de Petroff), H2SO4 12%, CPC 1,5% (Cetylpyridinium chloride) e NALC (N-acetyl-L-cisteine-NaOH). A inoculação foi realizada no meio inclinado Lӧwestein-Jensen enriquecido com piruvato de sódio 0,5%. Culturas foram incubadas em aerobiose a 37 °C e o crescimento foi acompanhado por até 12 semanas. As colônias sugestivas de M. bovis foram confirmadas como bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) depois identificadas por PCR multiplex, empregando-se os primers da sequência IS6110 do complexo M. tuberculosis, e o primer RvD1Rv2031c de M. bovis. Dos 27 animais abatidos, confirmou-se a presença de M. bovis em 22 (81,5%), sendo 19 vacas (13 TCC-positivo e seis TCC-inconclusivo) e os três búfalos TCC-positivo. O NaOH 4% mostrou a mais alta taxa de recuperação (77,3%), seguido pelo NALC (63,6%), H2SO4 (54,6%) e CPC 1,5% (45,5%). Segundo o teste qui-quadrado (Χ2), não houve diferença estatisticamente significante comparando o tipo de tratamento com os grupos positivo e inconclusivo no TCC (p>0,5). NaOH 4% em associação com o NALC foram capazes de recuperar o agente em 21 (95,5%) animais. Estes resultados indicam que os tecidos colhidos foram apropriados e o uso em paralelo de diferentes protocolos descontaminantes mostrou uma elevada sensibilidade para o isolamento de M. bovis a partir de tecidos de bovinos e búfalos com tuberculose.