Resumo

O interesse pelo estudo de microrganismos presentes em ambientes extremos é crescente, devido ao alto potencial biotecnológico que representam. A adaptação destes microrganismos a estes tipos de ambientes permite seu uso como ferramenta de remediação ambiental, devido ao seu potencial metabólico. Até recentemente, a microbiologia ambiental se baseou em metodologias clássicas. Todavia, é conhecido que apenas uma baixa porcentagem da microbiota natural (apenas 1-10%) pode ser cultivável em laboratório. A utilização de métodos moleculares vem permitindo uma mudança drástica na perspectiva do estudo da diversidade microbiana ambiental, principalmente através da análise de sequências de parte da região codificadora do gene 16S rRNA como ferramenta para inferir as relações filogenéticas e taxonômicas dos microrganismos. Neste trabalho, a partir de amostras de solo e água da mina de cobre da empresa Vale do Rio Doce localizada em Carajás, no estado do Pará, foi realizado o isolamento de bactérias resistentes a cobre e níquel. Para tanto, amostras de 1 g de solo ou de efluente foram cultivadas em três diferentes meios de cultura (MJS, TSM e Ramsay), em frascos agitados em shaker, a 28 °C, por 48 horas. Posteriormente, inóculos destas pré-culturas foram semeados nos mesmos meios de cultura contendo concentrações crescentes de Cu²⁺ ou de Ni²⁺: 1,25 mM; 2,50 mM; 5,00 mM e 10,00 mM, e incubadas a 28 °C, com agitação em shaker, por 48 horas. Das culturas que apresentaram crescimento em meio contendo metal foram isoladas bactérias resistentes a diferentes concentrações de Cu²⁺ ou de Ni²⁺. Para tanto, foi empregada a técnica de semeadura por esgotamento em meio sólido equivalente ao mesmo meio contendo metal em que a cultura havia sido obtida. Os isolados bacterianos mais promissores, isto é, aqueles que apresentaram os maiores níveis de resistência aos íons Cu²⁺ ou Ni²⁺, foram identificados através do o sequenciamento de parte do gene 16S rRNA. Foram isoladas quatro bactérias, sendo duas resistentes ao Ni²⁺ (2,50 mM e 5,00 mM) e duas resistentes ao Cu²⁺ (7,50 mM e 9,00 mM). A análise de similaridade realizada por meio alinhamento Blastn mostrou que três das quatro bactérias isoladas pertencem à espécie Cupriavidus metallidurans e o outro isolado pertence à espécie Pseudomonas putida.