Resumo

O gênero Bacillus inclui uma variedade de espécies importantes industrialmente e possui um histórico de uso seguro neste segmento. Este gênero apresenta espécies que sintetizam substâncias antagonistas contra bactérias e fungos, destacando-se a iturina A, um lipopeptídeo cíclico de amplo espectro de ação antifúngica e a subtilosina A que tem uma comprovada eficácia contra Listeria monocytogenes, demonstrando-se como uma opção atrativa que deve ser investigada pela indústria alimentar. Além disso, várias linhagens do grupo Bacillus subtilis sintetizam também a surfactina, considerada um dos mais poderosos biossurfactantes que já foram descobertos. Assim, o objetivo deste trabalho foi identificar um bastonete Gram-positivo, isolado de puba e pesquisar genes relacionados à síntese bacteriocinas e/ou lipopetídeos como o gene codificante de malonil CoA transacilase (ituD), da pré-subtilosina A (sboA) e do suposto gene terminador transcricional (sfp). O bastonete foi identificado por testes bioquímicos e fisiológicos (Kit API 50 CHB e 20E), pelo sequenciamento parcial do rRNA 16S e por meio da análise de ésteres metílicos de ácidos graxos (sistema Sherlock Microbial Identification), sendo esta cepa identificada como B. subtilis P5. Para a pesquisa de iturina A, o DNA foi extraído (SV Genomic DNA kit - Promega Corporation, Madison, WI, EUA) e o gene ituD foi amplificado por PCR com primers para ituD para a obtenção do fragmento de 1203 pb, correspondente a iturina A de B. amyloliquefaciens; primers para sfp foram usados para amplificação de um fragmento de 675 pb, correspondente a surfactina de B. subtilis e os iniciadores para sboA foram usados para amplificação de fragmentos de 734 pb, correspondentes ao grupo de genes de subtilosina A de B. subtilis. Os produtos da PCR foram sequenciados pelo sequenciador automático ABI PRISM-3100 Genetic Analyzer (Applied Biosystems). O algoritmo BLAST foi utilizado para buscar as sequências homólogas no GenBank e o software CLUSTAL W versão 1.8, para o alinhamento das sequências. A técnica de PCR, seguida de sequenciamento e análise dos amplicons, demonstrou elevada homologia (identidade mínima de 99%) com o gene iturina A. Também foram encontrados fragmentos 734 pb potencial para o gene sboA (subtilosina A) (identidade mínima de 98%) e de 675 pb, potencial para o gene sfp (surfactina) (identidade mínima de 98%). Os resultados sugerem que B. subtilis P5 possui grande potencial para diferentes aplicações biotecnológicas.