Resumo

INTRODUÇÃO.Candida albicans é um patógeno que habita a mucosa humana de forma comensal. Porém pode causar doença superficial e sistêmica em circunstâncias de suscetibilidade do hospedeiro. Diagnóstico otimizado e de baixo custo para detecção precoce é de grande importância em fungemias. Para a técnica de extração de DNA, a primeira fase representa a ruptura ou lise das membranas celulares. Entre as metodologias utilizadas com esta finalidade, tem-se a fervura, digestão enzimática, ruptura mecânica, ondas sonoras, os detergentes, soluções, agentes caotrópicos, na dependência do tipo de amostra ou célula. O Objetivo deste trabalho foi investigar qual a melhor metodologia empregada na lise celular de células fúngicas da espécie Candida albicans ATCC 36232.MATERIAIS E MÉTODOS..Candida albicans ATCC 36232 foi cultivado em 50 ml de Caldo Sabouraud por 24h. Em seguida, 1,5 ml do meio de cultivo foi centrifugado a 8000 RPM por 10 min, o sobrenadante foi desprezado e as células foram ressuspendidas em 180 µl de Tissue Lysys Buffer. Em triplicata, foram avaliadas 5 formas de lise celular: a) resfriamento a -70°C por 1 hora; b) aquecimento por 96°C por 10 minutos; c) digestão com proteinase K a 56°C por 1 hora; d) maceração em vidro com uma batida por segundo durante 120 segundos; e) controle. A etapa de purificação do DNA subsequente à lise foi realizada utilizando o Kit QIAamp (Tissue and Blood,Qiagen, Hilden, Germany). O DNA foi quantificado utilizando-se o quantificador de ácidos nucléicos GeneQuant pro®.DISCUSSÃO DOS RESULTADOS..Ao avaliar as concentrações de DNA obtidas, verificou-se que as amostras submetidas a resfriamento a -70˚C (16.5 ±1.80), utilização de proteinase K (34.6±1.76) e maceração (24,6±2.08) não apresentaram diferença significativa entre elas. As lise a 96˚C resultou na obtenção da maior concentração de DNA (162.6±27.43) e na melhor razão pureza (2.1). Os resultados obtidos foram avaliados através de ANOVA e do teste de Fisher pelo programa STATGRAPHICS 5.0 com nível de confiança de 95%.CONCLUSÃO.O método mais efetivo para lise de DNA para Candida albicans ATCC 36232 seguido de purificação pelo Kit QIAamp foi através de aquecimento a 96˚C.