Resumo

Os esporos têm assumido crescente contaminação do meio ambiente devido a sua ampla distribuição na natureza. Assim, torna-se importante e essencial o surgimento de pesquisas para avaliar a ação da terapia fotodinâmica (PDT) em esporos bacterianos como formas de resistência. O presente estudo avaliou a ação da PDT em esporos de Bacillus atrophaeus mediada pelo azul de metileno (AM) e o LASER. Colônias de Bacillus atrophaeus (ATCC 9372)foram cultivadas durante 7 dias em Ágar Nutriente acrescido de 0,003% de sulfato de manganês. As colônias obtidas foram suspensas em água destilada esterilizada e centrifugadas por 10 min a 653 Xg. O sobrenadante foi descartado e adicionado 1 mL de água destilada esterilizada para nova centrifugação por 3 vezes, e o pellet ressuspendido em 3 mL de água destilada esterilizada. A suspensão recebeu choque térmico de 70°C/30min e foi padronizada a 10⁶ células/mL. O VM foi utilizado na concentração de 37,5 μM. Foi utilizado LASER de Arseneto de Gálio Alumínio (660nm, 100mW, 20J/cm²).Em placa de 96 poços foi adicionado 0,1 mL de suspensão dos esporos e 0,1 mL do AM(F+L+). Para o grupo controle adicionou-se solução 0,1 mL de suspensão dos esporos e 0,1 mL de NaCl 0,9% (F-L-). A placa foi agitada durante 5, 10 e 30 min em agitador orbital e irradiada por 76 segundos. Realizaram-se diluições decimais (10^-3 e 10^-4)e alíquotas 0,1 mL foram semeadas em placa com Ágar Infusão Cérebro-coração e incubadas a 37°C/48h. As Unidades Formadoras de Colônias por mililitro (UFC/mL) foram contadas e transformadas em logaritmo. As médias obtidas em UFC/mL (log10) nos ensaios realizados foram submetidas à análise estatística, ANOVA e Teste de Tukey (p≤0,05). Observou-se redução de 0,71 UFC/mL (log10) no tempo de pré-irradiação de 10 min e 0,29 UFC/mL (Log10) no tempo de pré-irradiação de 30 min com diferença estatisticamente significante (p=0,003 e p=0,001 respectivamente) e 0,06 UFC/mL (log10) no tempo de pré-irradiação de 5 min sem diferença estatisticamente significante na comparação entre o grupo controle (F-L-) e o grupo submetido à PDT (F+L+). De acordo com os resultados obtidos em UFC/mL (log10), a inativação fotossensível de micro-organismos é um fenônemo complexo, com a probabilidade de aderência do fotossensibilizador na membrana externa da célula, permeando através da membrana celular, demonstrando que a localização do fotossensibilizador na célula pode ser o fator de determinação da eficácia destes no processo fotodinâmico. A PDT foi eficaz em esporos de Bacillus atrophaeus, utilizando-se o AM (37,5 μM), no período de pré-irradiação de 10 min, sob a ação do LASER durante 76 s.