Resumo

As bactérias do gênero Bacillus são formadoras de esporos extremamente resistentes às agressões ambientais e substâncias desinfetantes. A terapia fotodinâmica (PDT) atua como tratamento alternativo e/ou adjuvante contribuindo no desenvolvimento do controle de micro-organismos resistentes. O presente estudo avaliou a ação da PDT em esporos de Bacillus subtilis mediada pelo verde malaquita (VM) e o LASER. Colônias de Bacillus subtilis(ATCC 19659)foram cultivadas durante 7 dias em Ágar Nutriente acrescido de 0,003% de sulfato de manganês. As colônias obtidas foram suspensas em água destilada esterelizada e centrifigudas por 10 min a 653 Xg. O sobrenadante foi descartado e adicionado 1 mL de água destilada esterelizada para nova centrifugação por 3 vezes, e o pellet ressuspendido em 3 mL de destilada esterelizada. A suspensão recebeu choque térmico de 70°C/30 min e foi padronizada a 10⁶ células/mL. O VM foi utilizado na concentração de 300 μM. Foi utilizado LASER de arseneto de gálio alumínio (660 nm, 100 mW, 20 J/cm2). Em placa de 96 poços foi adicionado 0,1 mL de suspensão dos esporos e 0,1 mL do VM (F+L+). Para o grupo controle adicionou-se 0,1 mL de suspensão dos esporos e 0,1 mL de NaCl 0,9% (F-L-). A placa foi agitada durante 5, 10 e 30 min em agitador orbital e irradiada por 76 segundos. Realizaram-se diluições decimais (10^-3 e 10^-4) e alíquotas de 0,1 mL foram semeadas em placa de Ágar Infusão Cérebro-coração e incubadas a 37°C/48h. As Unidades Formadoras de Colônias por mililitro (UFC/mL) foram contadas e transformadas em logaritmo. As médias obtidas em UFC/mL (log10) nos ensaios realizados foram submetidas à análise estatística, ANOVA e teste de Tukey (p≤0,05). Observou-se redução de 0,23 UFC/mL (log10) no tempo de pré-irradiação de 5 min e 0,63 UFC/mL (log10)no tempo de pré-irradiação de 10 min com diferença estatisticamente significante (p=0,008 e p=0,002 respectivamente) e 0,09 UFC/mL (Log10) no tempo de pré-irradiação de 30 min sem diferença estatisticamente significante na comparação entre o grupo controle (F-L-) e o grupo submetido à PDT (F+L+). Os efeitos antimicrobianos da PDT dependem da concentração e localização do fotossensibilizador, tipo de micro-organismo, período de pré-irradiação e tipo de fonte de luz. Apesar da ação fotodinâmica obtida não apresentar grandes reduções em UFC/mL (Log 10), tais resultados não deixam de ser considerados importantes, pois trabalhou-se com o micro-organismo na forma esporulada. A PDT foi eficaz em esporos de Bacillus subtilis, utilizando-se o VM (300μM), no período de pré-irradiação de 10 min, sob a ação do LASER durante 76 s.