Resumo

Introducción: El género Pseudomonas comprende un conjunto de especies capaces de utilizar un amplio rango de compuestos orgánicos y de vivir bajo diversas condiciones ambientales. Estas especies asimilan azúcares y ácidos orgánicos preferencialmente a través de la ruta de Entner-Doudoroff, en la cual 6-fosfogluconato es un intermediario clave. Objetivo general: Modificación de la ruta Entner-Doudoroff en Pseudomonas aeruginosa PAO1 mediante la introducción de un operón artificial que contiene los genes pdc (piruvato descarboxilasa) y adhB (alcohol deshidrogenasa II) de la ruta etanologénica de Zymomonas mobilis, bajo la regulación del promotor represible del operón arabinosa. Materiales y métodos: Para la construcción de este operón artificial se realizaron 2 construcciones genéticas mediante PCR. La primera comprende la mínima región codificante del gen pdc y una región denominada adp1 de 29 pb, la segunda corresponde a la unión de adp2 (región de 29 pb complementaria a adp1) con la mínima región codificante del gen adhB y un terminador transcripcional específico para Pseudomonas. Para la fusión de ambas construcciones se realizó una tercera reacción de PCR, utilizando como partidores el oligonucleótido denominado pdc1 y la segunda construcción genética, utilizando el plasmidio pPD-B (plasmidio comercial + fragmento pdc-adp1) como DNA templado. La construcción resultante se ligó al vector pBAD-33 utilizando la enzima T4 DNA ligasa. La correcta construcción se analizó mediante análisis de restricción, PCR utilizando partidores que flanquean los extremos del operón y secuenciación. Resultados y conclusiones: Los análisis de restricción, PCR y secuenciación muestran la obtención de un fragmento mayor a 1707 pb correspondiente al producto pdc-adp1, un fragmento de 1229 pb para el producto adp2-adhB -term y 3073 pb para el operón completo. Todos estos tamaños coinciden con los tamaños teóricos esperados. Financiamiento: VRA-Universidad Diego Portales.