Resumo

As bactérias do gênero Salmonella continuam sendo uma das causas mais importantes de toxinfecções alimentares em todo o mundo. Muitos sorovares deste gênero, como Salmonella Enteritidis (SE), têm um reservatório animal específico, como por exemplo, frangos e suínos, estando sua transmissão ligada a alimentos obtidos destes animais. Ovos, carne e frango crus ou mal cozidos e leite não pasteurizado, estão entre os principais alimentos causadores do salmoneloses em seres humanos. O método de diagnóstico padrão leva em torno de sete dias para ser elaborado, dificultando ações que visem seu controle. Por isso, a implementação de técnicas moleculares para detecção e quantificação deste patógeno que ajudem a avaliar o risco e acelerar o processo têm sido estudadas. Este trabalho teve como objetivo desenvolver uma metodologia molecular baseada em PCR em tempo real para quantificação de SE em aves. Os ensaios foram montados utilizando-se a tecnologia TaqMan® com iniciadores e sonda baseados no gene sefA de Salmonella Enteritidis e curvas padrão em Nº de cópias do gene/g de conteúdo cecal para quantificação relativa ∆CT. O DNA de uma espécie não comum no ceco de frangos foi utilizado como DNA normalizador e amostras não tratadas (tempo zero) foram utilizadas como referência para efeito de calibração. O limite de detecção do método qPCR para o micro-organismo alvo, foi de 10 cópias do gene sefA/reação. Depois de otimizada, a metodologia foi validada utilizando-se DNA extraído de conteúdo cecal de frangos inoculados com SE. A SE foi detectada em todos os indivíduos inoculados com a bactéria e nos não inoculados, como esperado, não houve detecção de SE. Nos indivíduos inoculados com SE foram detectadas 2x10³ a 2x10⁶ cópias do gene sefA/g de conteúdo cecal. A metodologia empregada foi sensível, rápida e eficiente, tanto para discriminação quanto para quantificação da bactéria alvo, e pode ser utilizada para monitoramento da espécie em alimentos ou em ambiente de microbiota complexa, como o trato gastro intestinal das aves.