Resumo

Los organismos tolerantes al congelamiento poseen la capacidad de expresar proteínas del tipo anticongelantes (AFPs), nucleantes (INPs) o proteínas de histéresis térmica (THPs), como mecanismo de adaptación a temperaturas de congelamiento. Estas proteínas se han caracterizado principalmente en plantas y peces, y su estudio en bacterias se encuentra menos desarrollado. El objetivo de este trabajo fue detectar y caracterizar AFPs en bacterias aisladas de ambientes acuáticos fríos. Se analizaron cuatro cepas de bacilos Gram negativos de ambientes patagónicos (Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia, Psychrobacter fozii, Ochribactrum anthropi), una cepa de origen antártico (Psychrobacter cryohalolentis) y dos cepas de otros orígenes (Pseudomonas arsenicoxydans y Escherichia coli). Las cepas se sometieron a shock osmótico y a lisis por ultrasonido. La inhibición de la recristalización (IR) se determinó mediante ensayos HTAP (High-throughput AFP protocol) en placas de 96 pocillos con fondo plano, en presencia de 25% de sacarosa, o IR utilizando capilares o bolsillos creados con portaobjetos y cubreobjetos. Los resultados indican que las cepas B. cepacia, O. anthropi, P. cryohalolentis y P. arsenicooxydans tienen actividad anticongelante, en tanto las cepas S. maltophilia y P. fozii no demuestran esta capacidad. La actividad anticongelante se detectó en la fracción soluble de las suspensiones celulares lisadas por ultrasonido y centrifugadas a 12000rpm por una hora, y en el sobrenadante del shock osmótico, sugiriendo localización periplásmica. Ensayos preliminares de crio-protección indican que sólo el extracto de P. arsenicooxydans protege parcialmente la enzima sensible al congelamiento, Láctico Deshidrogenasa (LDHasa), sometida a 10 ciclos de congelamiento/descongelamiento. Los ensayos IR por HTAP y capilares o bolsillos, confirman la presencia de AFPs en las 4 cepas. Los resultados, en su conjunto, indican presencia de proteínas tipo AFPs en algunas cepas analizadas y que existirían, además, otros mecanismos que las protegen del congelamiento y permiten su sobrevivencia en ambientes fríos. Financiado Proyecto FONDECYT 1100462