Resumo

Shigella, causante de la disentería bacilar en humanos mediante la invasión de células del epitelio intestinal, provoca cuadros diarreicos que pueden poner en riesgo la salud, siendo S. flexneri la especie más frecuente en nuestro país. El uso de probióticos ha sido ampliamente utilizado para prevenir enfermedades infecciosas causadas por patógenos intestinales. En este trabajo se propone estudiar la capacidad de una mezcla microbiana (MM) constituida por 3 bacterias (Lactobacillus plantarum CIDCA 83114, L. kefir CIDCA 8348 y Lactococcus lactis CIDCA 8221 en concentración de 1x10⁹ufc/ml) y 2 levaduras (Saccharomyces cerevisiae CIDCA 8112 y Kluyveromyces marxianus CIDCA 8154 en concentración de 1x10⁶ufc/ml) aisladas de Kefir (un producto lácteo fermentado artesanal) de disminuir la invasión de S. flexneri sobre células Caco-2. Para analizar el efecto sobre la invasión, las células Caco-2 se pre-incubaron durante 1h con la MM o con el sobrenadante condicionado por dicha mezcla, y luego se incubaron durante 2h con S. flexneri (1x10⁸ufc/ml). Posteriormente se adicionó gentamicina 100ug/ml, se incubaron 1,5h y se realizó el recuento de S. flexneri. El número de bacterias internalizadas se determinó mediante recuento en placa con medio trypticsoy broth (CASOY), luego de lisar las células con agua destilada. Por otro lado, se estudió el efecto del Ca⁺² sobre la invasión de las células Caco-2 por S. flexneri, para lo cual la monocapa celular se pre-incubó durante 2h con DMEM libre de Ca⁺² y luego con S. flexneri durante 2 h más, determinándose la invasión mediante recuento en placa luego de la lisis celular. La invasión de S. flexneri sobre las células Caco-2 fue de 3.9x10⁵ UFC/ml. Sin embargo cuando se pre-incubaron de las células Caco-2 con la MM la invasión disminuyo notablemente (3,5x10¹UFC/ml). Por el contrario, cuando la monocapa se pre-incubó con el sobrenadante condicionado por la MM no se observaron diferencias significativas en la invasión. Por otro lado, la capacidad invasiva de S. flexneri fue de 3,4x10⁷UFC/ml cuando las células Caco-2 se pre-incubaron con medio de cultivo libre de Ca⁺², y en dichas condiciones, la invasión se redujo notablemente (4,5x10¹UFC/ml) luego de la pre-incubación con la MM. En conclusión, se observó que MM tiene un papel protector contra la invasión de S. flexneri tanto en presencia como en ausencia de Ca⁺², y dicho efecto está relacionado con la presencia de los microrganismos y no con metabolitos producidos por los mismos.