Resumo

E. coli enterohemorrágica (ECEH) es el principal agente causal de síndrome urémico hemolítico. La fagoterapia y los microorganismos probióticos han demostrado ser potencialmente efectivos en el tratamiento de infecciones con ECEH, sin embargo, en el uso de bacteriófagos la lisis bacteriana incrementa el efecto citotóxico mientras que en los tratamientos con probióticos el patógeno permanece viable. En este trabajo se estudió el efecto combinado de una mezcla de bacterias y levaduras aisladas de kefir (MM) y el fago CA933P frente a la adhesión y citotoxicidad de ECEH (EDL933). A fin de ensayar el efecto de los tratamientos sobre la adhesión de ECEH, una monocapa de células Hep-2 se incubaron con 1x10⁸ UFC/ml de ECEH sin tratamiento o tratadas con fago (f) a una MDI de 0,2, MM (1x10⁸UFC/ml bacterias, 1x10⁶ UFC/ml levaduras) o f+MM durante 1,5h a 37°C. Las células se lavaron, se lisaron y se determinó el número de E. coli adheridas por recuento en agar EC con novobiocina. Se analizó la viabilidad de las células Hep-2 luego de cada tratamiento por tinción celular con naranja de acridina/bromuro de etidio. Por otro lado se estudió el tratamiento con f, MM y f+MM frente al efecto citotóxico de ECEH, para ello una monocapa de células Hep-2 se infectó con ECEH (1x10⁸ UFC/ml) y se incubó 16h a 37°C con y sin tratamientos. Se cuantificó el desprendimiento celular mediante tinción con cristal violeta, extracción del colorante con etanol y medida espectrofotométrica a 540nm. Se observó que el número de E. coli adheridas (2,5x10⁵ UFC/fosa) no se vio afectado por la presencia de MM, pero tanto el f como el f+MM disminuyeron significativamente la adhesión en 0,5 log, sin observarse diferencia entre ambos tratamientos. Asimismo, en el análisis de viabilidad celular, el tratamiento con f+MM redujo notablemente la proporción de células Hep-2 apoptóticas (teñidas de rojo) y mantuvo la integridad de la monocapa celular respecto a las células no tratadas. Tanto el tratamiento con MM como con f+MM protegieron totalmente a las células Hep-2 del efecto citotóxico de ECEH, no observándose desprendimiento de la monocapa respecto al control de células no infectadas. Las células infectadas no tratadas presentaron un 40% de desprendimiento. El efecto combinado de fagos y MM probióticos resultó eficaz en la protección de células Hep-2 frente a la adhesión y el efecto citotóxico de ECEH.