Resumo

Arthrographis kalrae é um fungo dimórfico, cosmopolita e neurotrópico, que vem sendo descrito como um raro patógeno humano, com diversas manifestações clínicas, que vão desde onicomicoses e sinusite/meningite associado a AIDS, até acidente vascular cerebral fatal em paciente imunocompetente. Como este fungo é pouco conhecido e estudado, muitas vezes seu diagnóstico e tratamento são tardios ou errôneos. Como fungo emergente é importante conhecer os seus fatores de virulência e também é necessário introdução de uma metodologia rápida e especifica. Os objetivos deste trabalho foram analisar atividade citotóxica de antígenos solúveis de A. kalrae e suas frações cromatográficas. Para obtenção de antígenos solúveis totais (cell free antigens – CFA) o fungo foi cultivado em agar sabouraud dextrose por 5 dias, coletado em PBS, homogeneizado e centrifugado. O CFA foi então passado em coluna de cromatografia Sephadex G-150/120, obtendo-se as frações. Para o teste de citotoxicidade, células murinas tumorais P3U1 foram semeadas em placas de cultivo de 96 orifícios na concentração de 1x106 células/mL. Inicialmente, o CFA foi testado em várias concentrações e tempos de incubação. Assim, o CFA foi adicionado em concentrações que variaram de 0 a 1000 μg/mL, e as células foram incubadas a 37 oC por 30 min, 1, 2, 4, 8, 12, 24 e 48 h. A ação citotóxica foi avaliada pelo método de MTT. As frações foram testadas individualmente, por 2 h de incubação, nas concentrações de 25 a 250 μg/mL, com as demais condições iguais às do ensaio com CFA. Os resultados mostraram que a partir de 250 μg/mL de CFA, a porcentagem de células mortas foi acima de 70%, independente do tempo de incubação. Em relação às frações cromatográficas, houve 3 picos de citotoxicidade, sendo a maior com as frações correspondentes ao segundo pico da coluna, chegando a mais que 70 % de células mortas na maior concentração testada. Assim, neste trabalho, conclui-se que os antígenos solúveis de A. kalrae podem ter atividade citotóxica, possivelmente com baixo peso molecular, o que requer estudos adicionais.