Resumo

Salmonella enterica serovar Typhi es el agente etiológico de la tifoidea en el ser humano, su único hospedero conocido. Para completar su ciclo infectivo, S. Typhi debe ser capaz de invadir células epiteliales intestinales y diseminarse sistémicamente al interior de células fagocíticas. Esto lo consigue regulando finamente la expresión de numerosos genes en respuesta a cambios ambientales. El factor sigma alternativo RpoS (σS) es considerado como un regulador global de la transcripción de genes implicados en virulencia en respuesta a distintas condiciones ambientales asociadas a estrés. Durante la fase exponencial de crecimiento, a pesar de existir una transcripción activa del gen, los niveles de RpoS son muy bajos y alcanzan un máximo en la fase estacionaria. Se ha descrito que los reguladores transcripcionales CRP y Fis modulan la expresión de RpoS tanto a nivel transcripcional como a nivel de la cantidad de proteínas durante la fase exponencial de crecimiento en V. cholerae y S. Typhimurium respectivamente. En ambos casos la regulación está dada por la represión de la transcripción de rpoS mediante la unión de estos factores a distintas zonas de la región promotora de este gen. Hasta ahora se desconoce el rol de CRP y Fis en la regulación de la expresión de RpoS en S. Typhi. En este trabajo se evaluó el rol de estos reguladores en el control de la expresión de este factor sigma alternativo empleando como modelo la cepa clínica chilena de S. Typhi, STH2370. Empleando RT-PCR en tiempo real e hibridaciones western en cepas que poseen la fusión traduccional rpoS-3xflag, se evaluó el efecto de la deleción de los genes crp y fis en la expresión de RpoS de S. Typhi STH2370 en cepas crecidas hasta fase exponencial en medio LB con y sin glucosa. Se observó que tanto la deleción de crp como de fis no solo producen un aumento en la transcripción de rpoS sino que además producen un aumento en la cantidad de proteínas en la fase exponencial sólo en medio LB pero no en medio LB suplementado con glucosa. A partir de estos resultados se concluyó que CRP y Fis participan en la represión de la expresión de RpoS en S. Typhi STH2370.