Resumo

β-galactosidase, conhecida também como lactase, é uma enzima intracelular responsável por catalisar a lactose, e resultar em seus monossacarídeos constituintes, glicose e galactose. Sua importância industrial está na aplicação em alimentos com baixos teores de lactose, ideal para consumidores intolerantes à lactose pela melhora na digestibilidade do leite e derivados. Com uso de processos fermentativos para a obtenção de proteínas, enzimas ou fármacos, tem surgido um intenso estudo por sistemas eficientes para recuperação de materiais intracelulares obtidos por micro-organismos. Dentre as técnicas, pode-se citar o ultrassom, no qual ocorre o fenômeno de cavitação e o bead mill, processo que provoca o cisalhamento da membrana celular. Considerando que as enzimas são sensíveis às variações de temperatura e pH, é importante verificar como o método de extração interfere nas características da enzima. Dessa forma, objetivo deste trabalho foi avaliar as técnicas de ultrassom e moinho de bolas, para a extração de β–galactosidase produzida por K. marxianus, bem como verificar a estabilidade da enzima com o tempo, temperatura e pH e o pH e temperatura ótimos para sua atuação em decorrência do método de extração. Células de K. marxianus foram cultivadas à 30ºC e 150 min⁻¹ em YEP Lactose. Após, as células foram concentradas de modo a obter, em média 17 g.L^-1 e submetidas às técnicas de extração em diferentes tempos de ultrassonificação (10, 20, 30 e 40 min) com e sem pérolas de vidro e ultrassom seguido de moinho de bolas. O extrato enzimático obtido foi caracterizado quanto à temperatura ótima (30,37,45,55,60 e 70º C) e pH ótimo (2,5, 3, 3,5, 4,5, 5,5, 6, 7 e 8). Os resultados revelaram que a extração por ultrassonificação sem a presença das pérolas de vidro não proporcionou rompimento celular, o que foi evidenciado por não ser observado atividade enzimática nestas condições. A melhor técnica de extração foi aplicação do ultrassom (40 min) seguida de moinho de bolas, que aumentou a extração da enzima em 20% quando comparado com a extração apenas com moinho de bolas. Nestas condições, a atividade ótima da enzima foi observada na temperatura de 37 ºC e pH 7. Vale salientar que com o uso da técnica de extração utilizando somente o moinho de bolas, a enzima perdeu 32% de sua atividade.