Resumo

Acredita-se que S. aureus expressa em sua superfície uma proteína putativa, SA0587, homóloga à proteína PsaA encontrada em Streptococcus pneumoniae que está envolvida no transporte de manganês, além de ter sido caracterizada por alguns autores como adesina contribuindo para a virulência da bactéria. Foram feitas análises da sequência de aminoácidos da SA0587 em banco de dados de proteínas – PFAM, Uniprot e NCBI. Com o software Modeller foi feita a simulação da estrutura terciária da SA0587. Para caracterização da proteína, ela foi clonada no sistema pDRIVE e subclonada no vetor pAE. A expressão recombinante está sendo feita em Escherichia coli para purificação e ensaios funcionais. Foi observado que a SA0587 pertence a família "bacterial solute-binding protein 9 family" ou cluster 9, mesma família da PsaA e de lipoproteínas homólogas transportadoras de Mn⁺² e/ou Zn⁺². Alinhamentos da sequência de aminoácidos da SA0587 com estas proteínas mostram a conservação do sítio de ligação ao metal formado pelas cadeias laterais dos resíduos His67, His139, que compõem os motivos Asp–Pro–His (DPH), e pelos resíduos Glu205 e Asp280. O genoma da linhagem N315 de S. Aureus possui um operon constituído pelas ORFs 0587, 0588 e 0589 que codificam a SA0587, uma proteína transmembrana e uma ATPase citoplasmática, respectivamente, que formam um sistema ABC de transporte, reforçando a classificação da SA0587 como proteína de ligação e transporte de metais. Foi observado nas bactérias gram-positivas do cluster 9 uma alta porcentagem do resíduo lisina, o que não é observado nas proteínas da mesma família de bactérias gram-negativas. Suspeita-se que esses resíduos possam estar relacionados a formação de pontes salinas e estabilização da estrutura tridimensional dessas proteinas. Para tentar elucidar essa questão, dinâmicas moleculares com algumas proteínas da família estão sendo realizadas com o software gromacs e analisadas com o software VMD. A estrutura tridimensional da SA0587 obtida por simulação se assemelha a das proteínas já caracterizadas da família, apresentando dois domínios globulares e a proximidade dos resíduos de ligação ao metal no interior da molécula. Esse resultados mostram que, não só por homologia de sequências, mas por simulação de estrutura terciária, a proteína provavelmente é ligadora de metais, Mn⁺² e/ou Zn⁺², o que será confirmado experimentalmente.