Resumo

O estado de Pernambuco é um dos grandes produtores de palma forrageira no nordeste brasileiro e tem uma grande importância como alimentação do gado. Zimogramas são conhecidos como uma técnica eletroforética baseada em SDS-PAGE que contem um substrato copolimerizado em a matrix de poliacrilamida para a detecção da atividade enzimática. 05 cepas endofiticas e diazotróficos foram escolhidas de um screening de 300 isolados: Da palma miúda tradicional (P42) isolou-se através do meio NFb a cepa AM30 ( B. tropica ), a cultivar Palma de espinho frutífera (P44) também do meio NFb, isolou-se AM28 ( B. silvatlantica); da cultivar IPA 90-115, isolou-se a cepa AM37 ( H. seropedicae ), a cepa AM12 G. johanae foi isolada da cv. Chile fruit 51-1371 (P52) em meio LGI-P, e AM7, uma G. diazotrophicus , foi isolada do meio LGI-P. Usou-se para o zimograma de gelatina 1% e caseína 0,5%. O tampão de desenvolvimento usado foi da Bio-Rad Cat: 161-0766 para determinação de proteases neutras com pH 7,5. As bactérias foram crescidas em meio DYGS até a fase estacionária e depois submetidas por 1 minuto a sonicação em tampão SDS. As análises quantitativas mostraram no zimograma com gelatina bandas variando de 245 a 11 kDa, onde as cepas AM7 e AM37 foram que apresentaram duas proteases bem definidas com o tamanho variando de 35 a 48 kDa e 63 a 48 kDa, respectivamente. Quando se utilizou como substrato a caseína, apenas as cepas AM7 apresentou duas bandas de proteases com tamanhos bem definidos de aproximadamente 40 kDa e 22 kDa e a cepa AM12, outra Gluconacetobacter, mostrou mais duas bandas bem definidas com tamanhos de 63 kDa e 33 kDa aproximadamente. As demais cepas não mostraram a presença de proteases neutras. Enzimas proteolíticas chamadas de proteases jogam um papel importante em muitos processos biológicos. Existem uma família de proteases chamadas de PPIs (Inibidoras de Proteases em Plantas) que ocorrem comumente no reino planta. Normalmente, estas PIs, são induzidas em plantas em respostas a injurias ou ataque por insetos ou patógenos. Devido a importância destas proteínas, submetemos antes de determinar a quantificação de proteases através de zimograma, as cepas estudadas a atividade em placa de petri tendo como substrato caseina. E as bactérias que mais atividade apresentou foram as AM7 e AM37. Com este resultado, confirmamos a atividade enzimática destas proteases nestas cepas e que serão usadas em ensaio de plantas com a cultura da palma para observar se aumentam a defesa da planta após a inoculação com um patógeno.