Resumo

O gênero Mycobacterium possui mais de 100 espécies, dentre elas importantes patógenos como M. leprae, M. tuberculosis e M. bovis. Embora muito se conheça sobre estes patógenos, poucos estudos se concentraram na caracterização detalhada de micobactérias não tuberculosas (MNT), que apresentam distribuição ambiental variada e são oligotróficas. Embora muitas sejam consideradas saprófitas, acredita-se que a infecção sub-clínica de animais e humanos esteja subestimada. A infecção por MNT ambientais é considerada como um dos fatores que modulam a resposta protetora conferida pela vacina BCG. Neste contexto, o presente estudo tem como foco a caracterização das MNT de crescimento rápido provenientes da Coleção de Bactérias da Mata Atlântica (CBMA) do IOC/FIOCRUZ, com dois objetivos principais: (1) identificar antígenos e vias metabólicas compartilhadas entre espécies patogênicas e saprófitas e (2) caracterizar espécies que possam ser utilizadas no desenvolvimento de um novo sistema de expressão de proteínas heterólogas. Os isolados obtidos da CBMA/IOC foram cultivados em meios LB e Sauton, ambos contendo Tween 80, sob agitação a 25°C. Foram geradas curvas de crescimento a partir da leitura da OD a 600nm de triplicatas biológicas, e determinadas características morfológicas (tanto de colônias, em meio sólido, quanto das bactérias coradas por Ziehl-Neelsen). O perfil de secreção de proteínas ao longo do crescimento foi verificado por SDS-PAGE e a presença de metaloproteases secretadas avaliada por zimografia usando gelatina como substrato. Em paralelo, foi verificado por western blot a presença de antígenos micobacterianos comuns, já descritos como tendo papel importante na geração de resposta imune (por exemplo, Mpt 64, Mpt 70/83 e antígenos do complexo 85). A capacidade de transformação por plasmídeos está sendo avaliada por eletroporação. As análises por western blot de dois isolados revelaram a presença de proteínas do complexo 85 e ausência de reatividade para os antígenos Mpt 64 e Mpt 83. A capacidade de transformação foi verificada em outros dois isolados, que apresentaram elevada eficiência, sendo possível seu uso para o desenvolvimento do novo sistema de expressão de proteínas heterólogas secretadas.