Resumo

Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC), um dos patótipos de E. coli diarreiogênica, produtora das toxinas termo-lábil (LT) e termo-estável (ST), é um importante patógeno envolvido com diarreia em crianças abaixo de cinco anos e em turistas viajantes em áreas endêmicas. A identificação rápida e eficaz dessas diarreias auxilia no correto tratamento do paciente infectado. A engenharia genética tem sido utilizada para obtenção de anticorpos recombinantes de cadeia única (ScFv) em larga escala e com baixo custo, visando à manutenção de suas propriedades funcionais. Para utilização destas construções como ferramentas para o imunodiagnóstico é necessário que sejam padronizadas condições que favoreçam a expressão do ScFv. Este trabalho tem como objetivo a otimização da expressão do fragmento ScFv – LT de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) clonado no vetor pSMT3, o qual fusiona uma ubiquitina (SUMO) à proteína clonada, que visa otimizar sua solubilidade. A construção utilizada no trabalho foi obtida em trabalho anterior e sequenciada a fim de identificar os CDRs. Para a otimização da expressão foram utilizadas diferentes células bacterianas hospedeiras cultivadas em meio LB, 2YT e M9, com ou sem adição de glicose a 1% em temperaturas de 20, 30 e 37 °C. Para a indução, utilizou-se diferentes concentrações de IPTG, sem agitação, ou variando de 150 a 200 rpm por 2, 4 e 16-18 horas. Os CDRs das cadeias leve e pesada foram identificados com sucesso e não foram encontradas mutações nas cadeias após a clonagem. A maior expressão observada do anticorpo recombinante foi em E. coli BL21 (DE3) cultivada em meio 2YT com glicose a 1% e indução com IPTG 1 mM a 37 °C por 16-18 horas sob agitação de 150 rpm. Nossos resultados são promissores, já que as consecutivas modificações dos meios e condições de cultivo e indução favoreceram a expressão do ScFv – LT, que pode ser obtido em maior rendimento, o que é uma característica importante para uma ferramenta de diagnóstico.