Resumo

Introdução: Escherichia coli enteropatogênica atípica (aEPEC) é caracterizada pelo genótipo eae+/EAF-/bfpA- e ausência de expressão da fímbria BFP. Em um estudo prévio caracterizamos uma aEPEC não aderente (BA4013), transformada com o plasmídio pKC471 (BA4013[pKC471]), que expressa o gene espFu. A expressão de EspFu foi suficiente para a amostra tornar-se aderente em cultura de células HeLa. Neste trabalho estudamos o transcriptoma de ambas as amostras, após a interação com células HeLa, com o objetivo de realizar uma análise comparativa global dos transcriptomas. Materiais e métodos: Células HeLa cultivadas em DMEM até completa confluência foram infectadas com as amostras bacterianas (cultivadas em LB) e incubadas por 10min ou 3h a 37°C em estufa de CO2. O RNA bacteriano foi extraído e o perfil da expressão gênica global foi obtido utilizando o DNA microarray customizado de 15K. A análise comparativa foi realizada pelo método SAM (significance analysis of microarrays). Os transcritos diferencialmente expressos foram classificados em 3 grupos: (A)putative/hypothetical/predicted, (B)fitness e (C) fatores de virulência. Resultados e Discussão: A análise comparativa mostrou que a BA4013[pKC471] em 10min apresentou 20 transcritos hiper-expressos e 28 hipo-expressos, já em 3h apenas 33 transcritos estavam hiper-expressos e 383 hipo-expressos. A classificação destes transcritos mostrou que em 10min, 20 (41,5%) genes pertenceram ao grupo A, 17 (35,5%) ao grupo B e 11 (23%) ao grupo C, e em 3h, 111 (27%) genes foram agrupados em A, 288 (69%) em B e 17 (4%) em C. Destaca-se em 10min na amostra transformada a hiper-expressão de grlR e grlA, que regulam LEE em estágios anteriores à adesão e lesão A/E, e genes que codificam a fímbria tipo I. Em 3h, os transcritos em destaque são os genes hipo-expressos eae, tir e espZ, relacionados com a formação da lesão A/E e os genes hiper-expressos, como nleH. Há também uma grande quantidade (92%) de genes de fitness hipo-expressos pela amostra transformada. Conclusão: Nossos dados indicam que a amostra transformada hipo-expressa os genes de fitness para economizar energia e assim estabelecer a adesão e, consequentemente, a lesão A/E, conseguindo manter-se no ambiente intestinal. Provavelmente, estes processos são todos regulados direta e/ou indiretamente por EspFu.