Resumo

Introdução: O sucesso da infecção pelo Mycobacterium tuberculosis é atribuído à sua capacidade de sobreviver durante anos no organismo humano em um estado não replicativo (dormente), resultando em um quadro conhecido como infecção latente. A proteína HspX do M. tuberculosis, induzida sob condições de hipóxia, está fortemente associada com a viabilidade do bacilo na infecção latente. Considerando que bacilos dormentes apresentam morfologia e composição da parede celular distintas das bactérias em multiplicação, e que a proteína HspX é uma das mais abundantes na infecção latente, o presente estudo tem como objetivo, verificar se a expressão da proteína HspX altera a expressão de genes envolvidos com a síntese de componentes da parede celular. Metodologia: O gene hspX foi amplificado pela PCR a partir do DNA genômico do M. tuberculosis H37Rv e clonado no vetor de expressão pFPCA1GFP utilizando as enzimas de restrição BamHI e ClaI. A proteína HspX foi expressa em M. smegmatis mc²155, através da indução com acetamida. As bactérias, nas quais, a presença da proteína recombinante foi confirmada por Western Blot, foram utilizadas para a análise de expressão dos genes sigF e fbpA. O estudo de expressão gênica foi realizado utilizando a técnica RT-PCRq e o sistema de detecção SYBR®Green. O gene rrs (16S) foi utilizado como gene endógeno e as bactérias contendo o vetor não recombinante (não expressando a proteína) foram utilizadas como controle (calibrador da reação). O experimento foi realizado em triplicata. Discussão dos resultados: Foi possível verificar uma redução na expressão dos genes sigF (p<0,001) e fbpA (p<0,05) nas bactérias expressando a proteína HspX quando comparado aos controles. Ambos sigF e fbpA são genes importantes para a composição da parede celular de micobactérias. O gene fbpA codifica para a proteína Ag85A envolvida na biogênese do dimicolato de trealose (fator corda), enquanto o gene sigF codifica para o fator sigma F, subunidade sigma da RNA polimerase responsável pelo reconhecimento e inicio da transcrição de genes em resposta a condições de estresse. Uma alteração na expressão desses genes, em consequência da presença da proteína HspX sugere uma contribuição indireta, dessa proteína para a adaptação morfológica da bactéria durante a infecção latente. Conclusão: A superexpressão da proteína HspX altera a expressão dos genes sigF e fbpA. Entretanto, novos estudos são necessários para elucidar essa relação em nível de proteína.