Resumo

La citometría de flujo multiparamétrica corresponde a una poderosa herramienta en el campo de los bioprocesos, contribuyendo a obtener información de tipo fisiológica, además de la cuantificación de productos de interés en tiempos cercanos al real con el uso de marcadores adecuados. El presente estudio utilizó como modelo el microorganismo marino Crypthecodinum cohnii caracterizado por acumular un gran contenido de lípidos (cercano al 50% en peso seco), siendo el ácido docosahexaenoico (DHA) el ácido graso encontrado en mayor proporción, lo cual posiciona a este microorganismo como la base productiva de formulas infantiles enriquecidas con DHA (omega 3). Los métodos convencionales de extracción lipídica en estos bioprocesos implican largos tiempos de análisis, además de la gran toxicidad de los solventes utilizados. En este sentido, el uso de la citometría de flujo se muestra como un instrumento de gran utilidad, dado que puede proveer información sobre el aumento del contenido lipídico mediante fluorescencia. El objetivo del presente estudio consistió en determinar el óptimo de la concentración y del tiempo de incubación para dos marcadores de lípidos, además de establecer una correlación con el método convencional de extracción lipídica. Se utilizaron los marcadores BODIPY y Nile Red para la cuantificación de lípidos contrastados con el método de extracción Bligh and Dyer a partir de cultivos por lote de C. cohnii, cuya biomasa fue liofilizada. Los resultados mostraron que la correlación más alta (r² = 0,81) correspondió a la respuesta de fluorescencia de Nile Red frente al contenido de lípidos totales medido por Bligh and Dyer. Para este marcador se encontró un óptimo al incorporar 20 ul de solución del marcador (0,033 mg/ml) en 500 uL de suspensión celular (~10⁶ cell/ml), con un tiempo de incubación de 20 minutos a 37 °C en oscuridad. Estos resultados permiten establecer el potencial de la citometría de flujo multiparamétrica como una herramienta efectiva en el seguimiento, control y escalamiento de estos procesos.