XXI ALAM
Resumo:1217-3


Poster (Painel)
1217-3Caracterización fisiológica de cepas de Escherichia coli deficientes en el metabolismo de los polifosfatos inorgánicos.
Autores:Macarena Varas Poblete (U DE CHILE - Universidad de Chile) ; Javiera A. Álvarez (U DE CHILE - Universidad de Chile) ; Nelsón León Olivares (U DE CHILE - Universidad de Chile) ; Francisco P. Chávez (U DE CHILE - Universidad de Chile) ; Ricardo Cabrera (U DE CHILE - Universidad de Chile)

Resumo

Introducción: Los polifosfatos (poliP) son biopolímeros que tienen variadas funciones dependiendo de su localización celular. En Escherichia coli, su metabolismo es regulado por la enzima polifosfato quinasa (PPK1), que cataliza su síntesis, y la exopolifosfatasa (PPX) encargada de su degradación. Tanto la eliminación del gen ppk1 como la sobreexpresión del gen ppx generan una carencia de poliP, la cuál conlleva a numerosas alteraciones estructurales, funcionales y metabólicas en la célula. Para estudiar los cambios fisiológicos que ocurren durante la alteración del metabolismo de los poliP se analizaron las cepas mutantes para el gen Δppk1, Δppx y Δppk1-ppx durante su crecimiento en un bioreactor y se realizó una caracterización bioquímica utilizando galerías API 20. Metodología: Se utilizó un bioreactor con sistema por lote con capacidad para 1,6 L de cultivo, el cuál fue contenía medio mínimo M9 suplementado con glucosa y fue inoculado con las cepas de E. coli en estudio. Durante el crecimiento se monitoreo el pH, disponibilidad de oxigeno y consumo de glucosa en las diferentes fases del crecimiento. Por otra parte, se utilizaron las galerías bioquímicas API 20 (Biomerieux, Francia), las cuales fueron inoculadas con una suspensión bacteriana proveniente de una colonia fresca y se incubaron a 37ºC por 24 y 48 horas. Resultados: A partir de los ensayos en el bioreactor se pudo determinar la tasa de consumo de oxigeno y de glucosa durante el crecimiento. A partir de las curvas de crecimiento en medio mínimo M9 se pudo calcular el tiempo generacional para cada cepa, obteniéndose un μ=0,69 horas para la cepa silvestre, μ=0,97 horas para el mutante Δppk1, μ=0,84 horas para el mutante Δppx y μ=0,88 horas para el mutante Δppk1-ppx. Finalmente, con respecto a la caracterización bioquímica, los resultados indican que todas las cepas fueron negativas para la producción de H2S, ADH, OD, URE, TDA, acetoína y proteasas. Además, las cepas no pueden metabolizar como única fuente de carbono el citrato, inositol, amigdalina y sacarosa. Contrariamente, todas las cepas fueron positivas para la producción de ONFG, degradación del triptófano, metabolismo de glucosa y manosa. Conclusión: Con los resultados obtenidos se puede concluir que a pesar de tener alteraciones en el metabolismo de los poliP, todas las cepas tienen tasas de crecimiento comparables y mantienen su capacidad metabólica para la producción de compuestos y utilización de diferentes fuentes de carbono. Los resultados anteriores serán utilizados para calcular con más precisión los flujos metabólicos mediante los modelos matemáticos genómicos de E. coli.


Palavras-chave:  Escherichia coli, polifosfatos, metabolismo