Resumo

Escherichia coli Shigatoxigénica (STEC) es un patógeno que puede sobrevivir o incluso crecer en alimentos bajo diferentes condiciones de estrés químico. Se ha documentado que, aplicando concentraciones sub-letales de ácidos débiles, se pueden inducir fenotipos de múltiple resistencia a antibióticos (Mar) y modificar la expresión de diferentes factores de virulencia en microorganismos patógenos. El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto de conservantes alimentarios sobre la actividad de las toxinas Shiga (ST) y evaluar el efecto inductor de los mismos sobre el operón mar en STEC. La susceptibilidad in vitro a cloranfenicol, tetraciclina y ciprofloxacina se determinó por el método de dilución en caldo en 6 cepas STEC de origen alimentario. Se estudio el perfil de porinas por SDS-PAGE y se evaluó y cuantificó por Real Time PCR, la expresión de genes vinculados a Mar: acrA, acrB y marA. Para la cuantificación se utilizó el método 2-∆∆Ct respecto al gen normalizador gapdh. Para el estudio de la actividad de las ST, se evaluó el efecto citotóxico por la técnica de co-cultivo en microplacas con células Vero. En todos los ensayos se analizó la exposición a los 3 conservantes: sorbato de potasio, benzoato y propionato de sodio, en 2 concentraciones diferentes 1,25 y 5 mg/ml. Como cepas controles se utilizaron las Escherichia coli AG100, AG112, EDL 933, ATCC 25922. Las cepas expuestas a los conservantes incrementaron la resistencia 3 veces respecto a las no expuestas. En el análisis de proteínas de membrana externa se observó una disminución de la expresión de OmpF y un incremento de 2 veces en la expresión de los genes acrA, acrB y marA. La disminución en la susceptibilidad a los diferentes antimicrobianos y el incremento en los sistemas de eflujo activo señalan a los 3 conservantes ensayados como inductores del operon mar en cepas STEC. En los ensayos de citotoxicidad, se observó una disminución de 2 títulos en la actividad citotóxica utilizando 1,25 mg/ml de benzoato de sodio y 5 mg/ml de sorbato de potasio, y de 3 títulos con 5 mg/ml de benzoato de sodio. No se observó diferencia apreciable con propionato de sodio. Estos resultados demuestran que estos conservantes, al igual que otros compuestos que producen estrés químico, concurrentemente pueden reducir la patogenicidad bacteriana y aumentar su resistencia múltiple a los antimicrobianos.