XXI ALAM
Resumo:1112-1


Poster (Painel)
1112-1IDENTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS SECRETADAS POR DUAS ESPÉCIES DE LEPTOSPIRA, UMA PATOGÊNICA E UMA SAPRÓFITA.
Autores:Ligia Maria Piassi Ricardi (IBU - INSTITUTO BUTANTAN) ; Zenaide Maria Morais (USP - UNIVERSIDADE SÃO PAULO) ; Silvio Arruda Vasconcellos (USP - UNIVERSIDADE SÃO PAULO) ; Angela Silva Barbosa (IBU - INSTITUTO BUTANTAN) ; Patricia Antonia Estima Abreu de Aniz (IBU - INSTITUTO BUTANTAN)

Resumo

Introdução: A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A transmissão ocorre por meio de contato acidental com água, alimentos e solo contaminados com urina de animais infectados. Dados experimentais tem mostrado que a patogenia pode está relacionada à capacidade destas bactérias em aderir a proteínas de matriz extracelular, de escapar dos mecanismos de defesa apresentados pelo hospedeiro e de produzir toxinas. A secreção de proteínas para o ambiente extracelular é uma característica importante dos patógenos microbianos, por mediar interações com as células do hospedeiro durante a infecção. Não há registro na literatura da identificação de proteínas secretadas por leptospiras através da análise proteômica, apesar da predição, por ferramentas de bioinformática, de proteínas secretadas e da existência de genes homólogos de alguns sistemas de transporte conhecidos em outras bactérias. Objetivo: O presente trabalho teve como objetivo a identificação de proteínas secretadas por Leptospira interrogans sorovar kennewicki estirpe Pomona Fromm (patogênica) e Leptospira biflexa sorovar Patoc estirpe Patoc I (não patogênica) através de análise proteômica. Materiais e Métodos: Os dois sorovares foram cultivados sob condições aeróbicas em meio líquido EMJH enriquecido com BSA e soro de coelho. As proteínas secretadas foram identificadas empregando-se a eletroforese em gel bidimensional (2D-PAGE) e análise em solução (NON-GEL) associadas a tecnologia de espectrometria de massas acoplada a cromatografia líquida utilizando como fonte de ionização o eletrospray (ESI-LC.MS/MS). Resultados e Discussão: Um dos maiores obstáculos para os estudos envolvendo proteínas secretadas é a dificuldade de obtenção de extratos de proteínas extracelulares sem a contaminação citoplasmática e de componentes do meio de cultura. Por estas razões, várias abordagens experimentais foram utilizadas com o objetivo de aperfeiçoar o protocolo empregado. Tais análises identificaram 159 proteínas nos secretomas da espécie patogênica e 104 no secretoma da espécie saprófita, dentre elas 64 e 43 proteínas positivas (secretadas) na análise in silico, respectivamente. A identificação destas proteínas poderá contribuir para a elucidação dos mecanismos patogénicos e no desenvolvimento de novas estratégias para o tratamento e prevenção de leptospirose.


Palavras-chave:  LEPTOSPIRA INTERROGANS, EXOPROTEOMA, PROTEÍNAS SECRETADAS, LEPTOSPIROSE