Resumo

Entre los plásticos biodegradables, los polihidroxialcanoatos (PHA) son una familia diversa de poliésteres sintetizados por una amplia gama de microorganismos. Los PHAs son acumulados intracelularmente como respuesta a un desbalance de nutrientes en su ambiente, constituyendo una reserva de fuente de carbono y energía dentro de microorganismos para su sobrevivencia durante periodos de escasez. El crecimiento de la industria del biodiesel a nivel mundial ha generado una sobreproducción de glicerina, con la consiguiente baja de su precio debido a las impurezas presentes. La vía de fermentación microbiana es una opción para su aprovechamiento que está siendo re-evaluada. EL objetivo del presente trabajo es la selección de microorganismos productores de PHAs y la optimización de un medio de cultivo, utilizando como fuente de carbono glicerol y metanol (modelado como subproducto del biodiesel). Para la selección de microorganismos productores se utilizaron cepas pertenecientes al Dpto. de Bioingeniería y cepas adquiridas en ceparios. Además se planteo una estrategia de aislamiento de cepas de un efluente de biodiesel proporcionado por un productor local. Para cada cepa se realizó un seguimiento cualitativo, para evaluar crecimiento y producción de PHA mediante tinción de frotis con Violeta Cristal. Para las cepas positivas en esta tinción se realiza una confirmación por fluorescencia en UV en baño Azul Nilo en los cultivos sólidos. El componente clave para la síntesis de PHAs es la relación entre la fuente de carbono y el nutriente limitante. Se ha reportado que los nutrientes de mayor influencia en la síntesis de PHAs son la fuente de nitrógeno y la fuente de fósforo. Para la optimización del medio de cultivo se utilizó un diseño experimental factorial fraccionario con punto central 2<> sup4-1, para las cepas seleccionadas siendo los factores: Metanol/Glicerol (%v/v), NH4SO4(g/L), Na2PO4.12H2O (g/L) y KHPO4 (g/L), correspondientes a la fuente de carbono, fuente de nitrógeno y fuentes de fósforo. Se realizaron seguimientos de: biomasa, glicerol y metanol consumidos y PHA. Únicamente dos cepas fueron capaces de acumular PHA utilizando como fuente de carbono el efluente modelo: <>Ralstonia eutropha DSM 545, <>Metilobacterium extorquens DSM 1340. Para ambas cepas se optimizaron las condiciones del medio del cultivo. Para<> M. extorquens DSM 1340 se obtuvo un máximo 0.49 g/L de PHAs en 92 horas mientras que para <>R.eutropha DSM 545 se obtuvo un máximo de 0.69 g/L de PHAs en 48 hrs.