Resumo

Diversos gêneros incluídos na família Enterobacteriaceae apresentam grande relevância clínica. Entre eles, destaca-se Shigella, microrganismo associado a um quadro grave e bastante prevalente de diarreia inflamatória. Amostras de Shigella podem apresentar a habilidade de sintetizar bacteriocinas, substâncias de natureza proteica que exercem atividade bactericida ou bacteriostática, interferindo nas relações entre bactérias. Bacteriocinas podem contribuir para a virulência de Shigella, na competição contra microrganismos da microbiota intestinal indígena ou outras bactérias diarreiogênicas. Vimos desenvolvendo projetos que investigam atividade antagonista expressa por S. sonnei e, em estudos prévios, demonstramos a síntese de bacteriocinas por amostras da bactéria isoladas de espécimes fecais de crianças com diarreia aguda, selecionamos uma amostra e caracterizamos uma das substâncias detectadas em extrato proteico intracelular. A presente investigação foi realizada com o objetivo de purificar uma substância antagonista presente em extrato proteico extracelular, portanto, possivelmente secretada pela bactéria, e determinar a massa molecular e a sequência N-terminal da proteína. Após confirmação da expressão de antagonismo pelo método da sobrecamada, o extrato proteico extracelular precipitado com 75% de sulfato de amônio foi submetido a passos sequenciais de purificação por cromatografia de troca iônica, filtração molecular e fase reversa. A fração proveniente da última etapa de purificação foi submetida a análise por espectrometria de massa e os peptídeos discriminados, submetidos a sequenciamento da porção N-terminal por meio de fragmentação por laser em espectrômetro de massa. Foi detectada a presença de oito peptídeos com massas moleculares distintas, variando de 1023,473 a 2823,40Da. As sequências N-terminal de seis dos peptídeos apresentaram homologia de 100% com a da proteína β-caseína de diversas origens. Assim, considerando a homologia entre a sequência N-terminal dos peptídeos e a da β-caseína, é plausível hipotetizar que a(s) substância(s) antibacteriana(s) seja(m) derivada(s) da degradação de componentes presentes no meio de cultivo pela bactéria, não representando, portanto, uma substância sintetizada pelo organismo. Instituições de fomento: CAPES, CNPq, FAPEMIG, TWAS e PRPq/UFMG.