Resumo

A vacina BCG (Bacilo de Calmette-Guèrin), única medida profilática contra a tuberculose (TB), foi obtida no início do século XX por Calmette e Guèrin após 231 passagens de um isolado clínico de M. bovis cultivado em meio glicerinado contendo bile bovina. Sua eficácia protetora contra a TB pulmonar em adultos varia de 0-80% e as diferenças genéticas entre as diversas cepas vacinais utilizadas mundialmente contribuem para esta variação. A cepa vacinal brasileira, BCG Moreau, é considerada uma cepa primitiva, mais próxima do BCG original, quando comparada às cepas mais recentes, como BCG Pasteur (cepa de referência). Dados do nosso grupo indicaram um perfil proteômico bidimensional diferencial entre a cepa brasileira e a de referência, quando cultivadas em meio Sauton estático. Algumas das proteínas diferenciais identificadas pertencem ao grupo de proteínas que respondem a diferentes tipos de estresse. Neste trabalho caracterizamos o perfil de expressão comparativo destas proteínas em resposta ao estresse oxidativo utilizando a diamida como agente oxidante. Este composto oxida grupamentos tióis (-SH) resultando em proteínas na sua forma dissulfeto, afetando a homeostase redox e reduzindo a capacidade de detoxificação. Empregamos a fração protéica intracelular resolvida em eletroforese bidimensional (2DE) (pH 4-7) para confecção de mapas protéicos de alta resolução das cepas BCG Moreau e Pasteur. Os resultados revelam perfis protéicos quantitativamente distintos entre as cepas estudadas. As proteínas de interesse estão sendo identificadas por espectrometria de massas. Observamos que as proteínas moduladas divergem entre as cepas BCG Moreau e Pasteur, no entanto pertencem a mesma categoria funcional, sugerindo uma resposta final funcionalmente similar. O perfil transcricional dos genes selecionados foi avaliado por PCR em tempo real e a localização celular das proteínas correspondentes está sendo determinada por western-blot , empregando anticorpos policlonais produzidos a partir da forma recombinante das proteínas expressas em E.coli . Esperamos, desta forma, obter resultados que permitam a caracterização molecular da resposta ao estresse da cepa BCG Moreau comparada à cepa BCG Pasteur, e assim contribuir para uma melhor compreensão da cepa vacinal brasileira contra a TB.