Resumo

A linfadenite caseosa (LC) é uma enfermidade de ampla distribuição mundial causada por bactérias da espécie Corynebacterium pseudotuberculosis. Esta doença acomete principalmente pequenos ruminantes e é caracterizada pela formação de abscessos nesses animais, o que gera inúmeras perdas econômicas. Atualmente, não existem medidas profiláticas efetivas para o controle da LC em caprinos e ovinos, fato que nos direcionou a obtenção dos mapas proteômicos das linhagens 1002 e C231 de C. pseudotuberculosis isoladas desses animais, respectivamente. Estudos demonstraram que seis das 104 exoproteínas de C. pseudotuberculosis já caracterizadas são antigênicas e podem estar envolvidas em mecanismos de patogenicidade. Para ampliar o mapa imunoproteômico de candidatos a vacinas e diagnósticos, aperfeiçoamos o nosso protocolo já desenvolvido utilizando três novas estratégias: (i) um meio de cultivo bacteriano que mimetiza in vitro as condições no hospedeiro; (ii) um método de extração de proteínas com ácido tricloroacético-etanol; e (iii) uma técnica de espectrometria de massa de maior sensibilidade. Com a otimização do protocolo observamos um maior desempenho na análise sorológica dos exoproteomas das linhagens 1002 e C231 de C. pseudotuberculosis. Após o cultivo bacteriano em meio RPMI e extração protéica, as exoproteínas obtidas foram resolvidas em géis bi-dimensionais (2D-PAGE) e posteriormente transferidas para membranas de nitrocelulose para a realização do Western blot com soros de animais com LC. Os spots antigênicos foram excisados e tripsinizados para a identificação das proteínas através de espectrometria de massa Nano-MS. As seqüências peptídicas foram analisadas in silico com os dados dos genomas das linhagens 1002 e C231. Dezesseis novas proteínas antigênicas foram identificadas, dez em comum nas duas linhagens, 4 específicas da linhagem 1002 e duas específicas da linhagem C231. Os resultados obtidos através deste novo protocolo para extração de exoproteínas de C. pseudotuberculosis foram promissores e alguns desses alvos estão sendo selecionados para a utilização na elaboração de imunoprofiláticos, que contribuirão para o controle da LC nos rebanhos.