XXI ALAM
Resumo:939-1


Prêmio
939-1Análise do proteoma diferencial de uma linhagem de Corynebacterium pseudotuberculosis deficiente para o regulador transcricional sigma C
Autores:Thiago Luiz de Paula Castro (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Núbia Seyffert (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Wanderson Marques Silva (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Bianca Mendes Souza (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Rodrigo Dias de Oliveira Carvalho (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Luis Gustavo Carvalho Pacheco (UFBA - Universidade Federal da Bahia) ; Agenor Valadares Santos (UFPA - Universidade Federal do Pará) ; Alfonso Gala García (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Fernanda Alves Dorella (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Rachid Aref El-aouar Filho (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Hélida Monteiro de Andrade (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Anderson Miyoshi (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais) ; Christopher Gerard Dowson (UW - University of Warwick) ; Artur Silva (UFPA - Universidade Federal do Pará) ; Vasco Azevedo (UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais)

Resumo

Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva, intracelular facultativa, causadora da Linfadenite Caseosa (LC) em caprinos e ovinos. As perdas econômicas ocasionadas por esta doença são significativas em vários países, incluindo o Brasil. Embora o processo patogênico da LC seja conhecido, as estratégias para controle da doença são ineficazes e pouco se sabe acerca dos determinantes moleculares de virulência de C. pseudotuberculosis, tornando necessária a compreensão dos mecanismos de regulação da expressão gênica neste patógeno. Assim, nosso grupo de pesquisa tem estudado os fatores sigma (σ) da RNA polimerase bacteriana, os quais conferem o reconhecimento de promotores e determinam a ativação transiente da transcrição de conjuntos de genes específicos. O sequenciamento do genoma de C. pseudotuberculosis nos permitiu identificar 8 genes codificadores de fatores sigma, dentre os quais o σC se destaca por estar associado à virulência de M. tuberculosis, bactéria filogeneticamente próxima. Através da inserção sítio-dirigida de um plasmídio suicida, obtivemos uma linhagem mutante para o gene codificador do fator σC, a qual demonstrou suscetibilidade aumentada ao estresse oxidativo in vitro. No presente trabalho, com o intuito de avaliarmos o efeito da inativação do fator σC no perfil de proteínas expressas, cultivamos as linhagens mutante e selvagem parental em meio quimicamente definido (MQD) até a fase exponencial (DO600nm=0.4) e posteriormente submetemos as células à sonicação. Amostras de 3 réplicas experimentais foram ultracentrifugadas e as proteínas citoplasmáticas marcadas pelos corantes Cy3, Cy5 e Cy2 para eletroforese em gel bidimensional diferencial (DIGE), utilizando tiras de isofocalização não-linear de 18cm e pH entre 4 e 7. Comparando-se as linhagens selvagem e mutante, foram detectados 24 spots relativos a proteínas diferencialmente expressas em proporções superiores a duas vezes, dentre as quais 21 foram produzidas em maior quantidade pelo mutante. Este resultado sugere que a linhagem mutante para o fator σC ativa mecanismos compensatórios para a viabilidade bacteriana que podem estar envolvidos nos processos de oxido-redução. Está em andamento a identificação das proteínas diferencialmente expressas através de espectrometria de massa, o que permitirá a elucidação dos mecanismos regulados pelo fator σC em C. pseudotuberculosis.


Palavras-chave:  Corynebacterium pseudotuberculosis, sigma C, proteômica, DIGE