Resumo

A aquicultura é um dos setores da agropecuária brasileira com maior expansão atualmente. Bactérias do gênero Streptococcus associadas a alguns fatores como alta densidade de peixes, seleção de espécies, entre outros, tem levado ao desenvolvimento de doenças associadas aos cultivos. Essas doenças emergentes levam a perdas em grande escala na produção. Um dos principais limitantes para o tratamento dos peixes e não comprometimento da produção é o rápido e correto diagnóstico da natureza etiológica da doença. No Brasil e na América do Sul a espécie Streptococcus agalactiae é responsável em grande parte pela ocorrência de estreptococose em Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) causando prejuízos na produção. As técnicas de biologia molecular, como a PCR, propiciaram rapidez e uma melhora significativa na eficiência e qualidade do diagnóstico. O presente trabalho objetiva contribuir para o processo de diagnóstico de estreptococose, sobretudo causada por S. agalactiae propondo iniciadores específicos alternativos aos já descritos. Para tanto, foram recuperadas sequências do gene ribossomal 16S de todas as bactérias do gênero Streptococcus, do banco de dados NCBI. Duzentas e duas sequências foram alinhadas e analisadas em relação a sua filogenia e diversidade através do programa MEGA 5.05. Uma árvore foi construída, onde foram observados agrupamentos específicos para cada espécie. Com base nas regiões conservadas e variáveis foram selecionados dois iniciadores, utilizados para testes de amplificação específica. Os iniciadores foram avaliados quanto à formação de estruturas secundárias como grampos e dímeros. Foram avaliadas ainda a temperatura de melting e especificidade in sílico. O primer forward (5’ TGGTAGGAGTGGAAAATCTACC 3’) possui 22 pares de bases, temperatura de melting em 62,5ºC, 45,5% de bases CG. O primer reverse (5’ CTTCTGCACTCAAGTCCTCC 3’) possui 20 pares de bases, temperatura de melting de 60,7ºC, 55% de bases CG. O amplicon gerado apresentou 211 pb. Os iniciadores selecionados foram avaliados quanto à capacidade de amplificar DNA de amostras de cultura de S. agalactiae. Foram avaliadas dez amostras sendo que houve amplificação em todos os casos. Os iniciadores estão sendo testados quanto à eficiência e especificidade, sendo que serão posteriormente usados em amostras de campo para diagnóstico.