Resumo

O melhoramento genético clássico é uma estratégia viável para microrganismos com capacidade de reprodução sexuada. Uma vez que a frequência de mutação espontânea é baixa, células de levedura são tratadas com agentes mutagênicos como radiação ultravioleta, ácido nitroso dentre outros. Essa estratégia traz consigo a vantagem de permitir a obtenção de linhagens estáveis e sem estigma de um organismo geneticamente modificado. As mutações resultantes podem ser quantificadas usando-se um marcador fenotípico, como por exemplo, a sensibilidade a canavanina, um análogo estrutural tóxico da arginina, e mutações podem tornar as células resistentes a seu efeito ou ainda a via biossintética da adenina fenótipo que pode ser distinguido pela cor da colônia em meio não seletivo. Pelo exposto objetivou-se obter mutantes das estirpes de S.cerevisiae GF12, GF-33, CCA083, GF 88 pertencentes à coleção de culturas do Laboratório de Microbiologia da Universidade Federal de Lavras, utilizando radiação ultravioleta como agente mutagênico. Para o teste da irradiação os isolados foram cultivados em 15 mL de caldo YEPG a 28°C/48h, centrifugados (4000 rpm/3min) e ressupenso em 15 ml de solução salina (0,9% de NaCl). O inóculo foi padronizado por leitura de absorbância a 600 nm com o objetivo de obter 2000 células/ml. A suspensão celular foi irradiada por 3 segundos a 100 micros Joule sendo as placas incubadas 28°C/7 dias. Para seleção dos mutantes utilizou-se a canavanina e a adenina como marcas. Para a adenina preparou-se YEPG modificado (5% de extrato de levedura) com aparecimento de colônias rosa e vermelhas e para a marca canavanina meio SD (bacto base de nitrogênio de levedura sem aminoácidos 0,67%, glicose 2%, ágar-ágar 2% com adição de canavanina (60 mg/ L) a qual permite que apenas os mutantes cresçam no meio sólido . Neste trabalho foram obtidas linhagens mutantes para os dois marcadores pretendidos, mas não para todas as linhagens. Para a marca canavanina foram obtidas uma colônia mutante para a linhagem GF33, 56 para CCA083, 2 para GF12 e 1 para GF88. A segunda marca (adenina) até o momento foi obtida para as linhagens CCA083, GF12 e GF88. Espera-se que com a obtenção desses marcadores fenotípicos o teste de cruzamento entre as estirpes seja realizado sendo as linhagens-filha submetidas a testes de fermentação para avaliar se melhorias no processo foram obtidas.