Resumo

Proteases microbianas possuem ampla aplicação nas indústrias alimentícias, farmacêuticas, vinícolas, alcoólicas, dentre outras. As proteases estão entre as enzimas mais estudadas e correspondem a aproximadamente 60% da venda total de enzimas no mundo. Visando maximizar as vantagens da biocatálise, novos produtores de enzimas, como as leveduras, são prospectados dos mais diversos micro habitats distinguindo-se em habitats onde os carboidratos estão presentes. Este trabalho teve como objetivo caracterizar a produção de proteases extracelulares pela levedura Schwanniomyces polymorphus, coletada do fruto da jabuticaba, caracterizando bioquimicamente suas enzimas. A espécie Schwanniomyces polymorphus, foi reavaliada por identificação genômica através da análise do sequenciamento de seu rDNA. A fermentação para produção de proteases extracelulares foi realizada em meio mínimo para fermentação (MMF) composto por 20g.L-1 de Glicose, 7,5g.L-1 de Peptona de carne, 4,5g.L-1 de Extrato de levedura. A fermentação foi realizada em temperaturas variando entre 26-35ºC e pHs de 6,2-8,2. O ensaio enzimático para determinação da atividade proteolítica seguiu-se utilizando azocaseína como substrato. Uma unidade de atividade proteolítica foi definida como a quantidade de enzima capaz de produzir um aumento na absorbância de 0,001.min-1 em uma hora a 440nm, sendo a atividade expressa em U.mL-1. A temperatura e pH e ótimos para a atividade das proteases foram determinados pela incubação do sobrenadante da cultura em diferentes pHs entre 6,2-8,0 e temperaturas entre 20-45ºC. O número de isoformas das proteases foi determinado por gel de poliacrilamida (PAGE) contendo gelatina em condições nativas. Schwanniomyces polymorphus apresentou maior produção de enzimas proteolíticas (289,9 U.mL-1) quando a fermentação foi realizada em meio MMF na temperatura de 28ºC e pH 7,8. A atividade das enzimas proteolíticas extracelulares contidas no sobrenadante deste isolado foram submetidas a caracterização enzimática apresentando temperatura ótima de 35ºC e pH ótimo 8,0. Análise do sobrenadante da cultura usando o gel da atividade proteolítica resultou em 3 bandas isomórficas. Portanto, Schwanniomyces polymorphus, extraída de jabuticaba, apresentou melhor produção de enzimas proteolíticas extracelulares nas condições de mínimas de fermentação na temperatura de 28ºC e pH 7,8.