XXI ALAM
Resumo:796-1


Poster (Painel)
796-1Identificação de proteinas secretadas por Kluyveromyces marxianus UFV-3 em meio contendo lactose
Autores:Raphael Hermano Santos Diniz (UFV - Universidade Federal de Viçosa / UDC - Universidade da Coruña) ; María Esperanza Cerdán Villanueva (UDC - Universidade da Coruña) ; María Isabel González Siso (UDC - Universidade da Coruña) ; Wendel Batista Silveira (UFV - Universidade Federal de Viçosa) ; Flávia Maria Lopes Passos (UFV - Universidade Federal de Viçosa)

Resumo

A utilização de leveduras para produção de proteinas de interesse industrial, a partir de resíduos agroindustriais e florestais, é uma alternativa promissora para aliar o tratamento destes resíduos à obtenção de produtos biotecnológicos. Assim, a descoberta e identificação de proteinas com potencial biotecnológico que possam ser expressas e secretadas em meios de cultivo de baixo custo vêm despertando cada vez mais interesse. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi identificar proteinas diferencialmente secretadas pela levedura Kluyveromyces marxianus UFV-3 em meio contendo lactose, carboidrato presente no soro de queijo, resíduo da indústria de laticínios. Diferentes formas de cultivo de K. marxianus UFV-3, em biorreator, foram analisadas no intuito de identificar as condições que propiciam maior secreção de proteinas. Os cultivos analisados foram: batelada; batelada alimentada (diluição inicial de 0,05 h-1 e 0,1 h-1) e cultura contínua (diluição de 0,1 -1 e 0,3 -1). Para observar a diversidade de proteinas secretadas, foram utilizados géis, SDS-PAGE, corados com coomassie-blue coloidal ou com prata. As bandas mais intensas foram excisadas, digeridas e analisadas em espectrômetro de massa (MALDI-TOF/TOF) e posteriormente identificadas utilizando os softwares MASCOT™ e ProteinPilot™. Os cultivos realizados em batelada alimentada com diluição inicial de 0,05 h-1 e cultura contínua com diluição de 0,1 h-1 apresentaram maior diversidade e concentração de proteinas. Em todos os cultivos realizados, a proteina secretada com maior intensidade foi identificada como uma poliendogalacturonase (EC: 3.2.1.15). Esta enzima hidrolisa ligações α-1-4 galacturônicas de pectinas e outras galacturonas, possuindo aplicações na indústria têxtil, alimentícia, de celulose, dentre outras. As outras bandas analisadas não foram identificadas nos bancos de dados disponíveis. Isto ocorreu provavelmente devido aos bancos de dados de K. marxianus serem incompletos. Deste modo, este trabalho demonstrou que K. marxianus UFV-3 secreta uma poliendogalacturonase com potencial biotecnológico, em meio contendo lactose, e que a secreção desta enzima é aparentemente modulada pela forma de cultivo e taxa de diluição na qual a levedura é cultivada.


Palavras-chave:  batelada alimenta, cultura contínua, Kluyveromyces marxianus, MALDI-TOF/TOF, poliendogalacturonase