XXI ALAM
Resumo:713-2


Poster (Painel)
713-2Comparação entre eletroforese de enzimas multiloco (MLEE), eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) e marcadores microssatélites (SSRs) na determinação de subtipos de Candida albicans
Autores:Marcelo Fabiano Gomes Boriollo (FOP/UNICAMP - Faculdade de Odontologia de Piracicaba - UNICAMP / UNIFENAS - Universidade de Alfenas - UNIFENAS) ; Thaísla Andrielle Silva (UNIFENAS - Universidade de Alfenas - UNIFENAS) ; Manoel Francisco Rodrigues Netto (FOP/UNICAMP - Faculdade de Odontologia de Piracicaba - UNICAMP) ; João Evangelista Fiorini (UNIFENAS - Universidade de Alfenas - UNIFENAS) ; Nelma de Mello Silva Oliveira (UNIFENAS - Universidade de Alfenas - UNIFENAS) ; José Francisco Höfling (FOP/UNICAMP - Faculdade de Odontologia de Piracicaba - UNICAMP)

Resumo

Múltiplos sistemas moleculares encontram-se disponíveis para os propósitos científicos epidemiológicos, genéticos, evolutivos, taxonômicos e sistemáticos (e.g., MLEE, EK, RAPD, RFLP, SSRs e outros). Essa pesquisa avaliou os sistemas de tipagem MLEE, PFGE e SSRs na identificação de subtipos (linhagens) de C. albicans. Setenta e cinco isolados clínicos bucais de C. albicans foram estudados. MLEE: Leveduras foram cultivadas em 50 mL de meio YEPD a 37 °C/ 18h e, então, lavadas por centrifugação. Enzimas foram extraídas em água bidestilada gelada usando pérolas de vidro e agitador BeadBeater®. Procedimentos de eletroforese e revelação de géis foram realizados para 11 izoenzimas (Adh, Sdh, M1p, Mdh, Idh, Gdh, G6pdh, Asd, Cat, Po e Lap). SSRs: DNA extraído foi quantificado por espectrofotometria (260nm). Três loci microssatélites foram investigados pela técnica de PCR (HIS3, EF3 e CDC3), eletroforese em gel de poliacrilamida (tampão desnaturante) (60W/42mA/1500V; 50-55°C; 90min) e revelação por AgNO3. PFGE: Leveduras recém cultivadas (109 células/mL), tratadas previamente com solução de liticase, foram misturadas com agarose low gelling temperature 1% (100mM EDTA pH 8, 10mM Tris-HCl pH 7,6 e 20mM NaCl). Plugs de agarose foram incubados a 37°C/ 48h (500mM sodium EDTA pH 8, 10mM Tris-HCl pH 7,6, 7,5% β-mercaptoethanol) e a 50°C/ 48h (6,25mL de 100mM EDTA pH 8, 10mM Tris-HCl pH 7,6, 20mM NaCl, 1mg Proteinase K/mL e 1% sodium N-laurylsarcosine). DNA cromossômico foi separado em sistema CHEF-DRII (BioRad) (4V.cm-1/14°C/90-325s/48h/120°). Os géis foram revelados com solução de C21H20BrN3. Perfis moleculares eletroforéticos foram geneticamente (MLEE e SSRs) e numericamente (PFGE) interpretados. Alta capacidade discriminatória (>96%) desses métodos foi observada, baseando-se na interpretação dos perfis eletroforéticos de isoenzimas (MLEE), amplicons (SSRs) e DNA íntegro (PFGE). Contudo, um baixo percentual (<23%) de isolados provou ter a mesma identidade genética (subtipos) quando cada método foi investigado e comparado aos pares: 19,7% de concordância entre MLEE e SSRs ou SSRs e PFGE e 22,4% entre MLEE e PFGE. Essa pesquisa colabora com os estudos que apontam para a necessidade de usar no mínimo dois métodos moleculares distintos para a tipagem de C. albicans. Ainda, correlações epidemiológicas moleculares e clínicas envolvendo esse patógeno oportunista podem ser atribuídas dependentemente de cada método de tipagem. A associação dos resultados de dois ou mais sistemas de tipagem pode fornecer maior confiança e consistência na determinação de subtipos de C. albicans.


Palavras-chave:  C. albicans, cavidade bucal, rastreamento epidemiológico, genotipagem, MLEE, SSRs e PFGE