Resumo

Corynebacterium pseudotuberculosis é um patógeno intracelular de grande relevância veterinária que infecta pequenos ruminantes, causando uma enfermidade conhecida como Linfadenite Caseosa. Apesar da patogenia da doença ser bem entendida, existem poucos estudos sobre as bases moleculares de virulência deste microrganismo. Com o intuito de compreender o papel dos determinantes de patogenicidade e como estes são regulados no processo de infecção, nosso grupo de pesquisa tem se dedicado ao estudo das proteínas moduladoras da expressão gênica. A regulação da expressão gênica, realizada por fatores sigma alternativos é crucial para a adaptação e sobrevivência de patógenos intracelulares por promoverem a ativação transiente de genes específicos envolvidos na resposta a condições hostis encontradas no ambiente intrafagossômico. Em C. pseudotuberculosis, &sigmaE é o fator sigma alternativo mais estudado, tendo sido demonstrado seu envolvimento na resposta adaptativa deste microrganismo ao estresse nitrosativo. Entretanto ainda não tinha sido realizado um estudo aprofundado acerca da regulação da expressão do gene sigE, que codifica este fator. Neste trabalho foi realizada a caracterização da estrutura da unidade transcricional deste gene utilizando algoritmos de bioinformática e através de ensaios de RT- PCR na tentativa de confirmar se o gene sigE da linhagem 1002 de C. pseudotuberculosis estaria organizado em operon juntamente com os genes cseE e tatB, genes que codificam respectivamente um possível regulador negativo do fator sigma E e um componente de um sistema de secreção alternativo, Twin Arginine Translocase. Além disso, os níveis de expressão dos genes sigE, cseE e tatB foram avaliados pela técnica de RT-qPCR em culturas expostas aos estresses nitrosativo e ácido in vitro a fim de se confirmar o envolvimento destes genes na resposta adaptativa específica a estes estresses. Os resultados obtidos neste trabalho, confirmaram que os genes sigE, cseE e tatB constituem um operon nesta espécie e que os genes sigE e cseE são ativados na resposta de C. pseudotuberculosis 1002 aos estresses nitrosativo e ácido, enquanto que o gene tatB é ativado somente na resposta ao estresse nitrosativo. Tomados juntos, esses dados sugerem que os genes deste operon possam ser regulados diferencialmente, por um mecanismo complexo a nível transcricional, dependendo do estímulo do ambiente. Apoio: CAPES e CNPq