Resumo

O Dengue vírus (DENV), pertencente à família Flaviviridae, apresenta fita de RNA única senso positiva. Atualmente são conhecidos quatro sorotipos antigenicamente distintos. O desenvolvimento de uma vacina para dengue é considerada prioritária diante a magnitude do problema. A proteína E é fundamental para a ligação viral ao receptor de membrana como também pelo processo de fusão vírus-membrana celular. Esta proteína é considerada o maior alvo dos anticorpos neutralizantes anti-dengue. Diante dos fatos apresentados, torna-se evidente a necessidade de se obter candidatos vacinais que confiram imunidade eficiente e duradoura contra os quatro sorotipos de dengue. O peptídeo escolhido está presente na proteína E e foi desenhado de acordo com o dados descritos por Mazumder e colaboradores em 2007. Este peptídeo apresenta resíduos que estão presentes somente no grupo dos DENV, são extremamente conservados entre os quatro sorotipos de DENV e possui alta afinidade para a ligação ao MHC classe II. O mini-gene codificador do peptídeo foi sintetizado através de reações de PCR assimétrico. Após sintetizado, este foi clonado em plasmídeo de expressão de proteínas pTrcHis (Invitrogen) e os plasmídeos recombinantes foram utilizados na transformação de bactérias E. coli M15. Os clones recombinantes foram selecionados por PCR e induzidos a expressar o peptídeo através da adição IPTG 2mM ao meio de cultura. Após as reações sequenciais de PCR assimétrico, pode-se obter um fragmento de ~200pb. Este foi clonado em pTrcHis e a ligação foi utilizada para transformar bactérias E. coli M15.Foram selecionadas 20 colônias, as quais foram utilizadas como molde na reação PCR para verificação da presença do inserto. Pela amplificação pode-se confirmar a presença de um inserto de ~200pb. Os clones recombinantes foram induzidos a expressar o peptídeo e os resultados de eletroforese em gel SDS-PAGE confirmam a expressão da proteína com peso molecular de ~ 11 KDa. O peptídeo foi obtido com sucesso através da clonagem do mini-gene e expressão em E. coli. Estudos futuros deverão ser conduzidos para a purificação da proteína recombinante e avaliação de seu desempenho em ensaios de imunização e em testes imunoenzimáticos.