XXI ALAM
Resumo:693-1


Poster (Painel)
693-1EXPRESSÃO EM SISTEMA PROCARIOTO DE PEPTÍDEO RECOMBINANTE TRIVALENTE COM O POTENCIAL PARA DESENVOLVIMENTO DE TESTES DIAGNÓSTICO E VACINAS PARA A FEBRE AFTOSA.
Autores:João Leite Costa Prado (UNIFAL-MG - Universidade Federal de Alfenas) ; Raissa Prado Rocha (UNIFAL-MG - Universidade Federal de Alfenas) ; Luiz Cosme Cotta Malaquias (UNIFAL-MG - Universidade Federal de Alfenas) ; Luiz Felipe Loemil Coelho (UNIFAL-MG - Universidade Federal de Alfenas)

Resumo

A Febre Aftosa é causada por um vírus não envelopado, RNA fita única senso positiva pertencente ao gênero Aphtovirus da família Picornaviridae. O desenvolvimento de testes diagnósticos e novas vacinas para a Febre Aftosa é fundamental, pois é uma doença epidêmica, altamente contagiosa, que afeta bovinos, suínos e ovinos. Atualmente já foram identificados sete sorotipos antigeneticamente distintos, e três destes compõem a vacina comercializada. Entretanto, novas abordagens são necessárias para o desenvolvimento de novas vacinas e testes de diagnóstico para a febre aftosa. Através da análise de bioinformática da proteína estrutural VP1 e dados da literatura foram selecionadas 04 regiões altamente conservadas e com probabilidade alta de ligação ao MHC. Através destas regiões construiu-se um gene artificial que codifica uma proteína trivalente com o potencial para o desenvolvimento de testes diagnósticos e vacinas para a Febre Aftosa. O gene artificial foi sintetizado por quatro reações de PCR assimétrico utilizando oligonucleotídeos específicos. O fragmento obtido foi clonado em plasmídeos de expressão de proteínas pTrcHis (Invitrogen) e utilizados para transformação de bactérias Escherichia coli M15 por choque térmico. Os clones recombinantes foram selecionados por PCR e induzidos a expressar a proteína recombinante com a adição de IPTG 2mM ao meio de cultura. A presença da proteína recombinante foi verificada através de eletroforese em gel de SDS-PAGE corado pelo método de coomassie blue. Através de reações de PCR assimétrico foi possível sintetizar o gene artificial, o qual possui 320 pb. Este fragmento foi clonado em plasmídeos pTrcHis e o plasmídeo recombinante utilizado para transformar bactérias Escherichia coli M15. Foi selecionado um clone recombinante por PCR e este foi induzido a expressar a proteína recombinante após a adição de IPTG ao meio de cultura. Os resultados de eletroforese em gel SDS-PAGE confirmam a expressão da proteína com peso molecular de aproximadamente 14 KDa. O gene artificial foi sintetizado com sucesso através de reações de PCR assimétrico e expresso em sistema procarioto. Estudos futuros deverão ser conduzidos para a purificação da proteína recombinante e avaliação da sua performance em ensaios de imunização e em novos testes imunoenzimáticos.


Palavras-chave:  Diagnóstico, Febre Aftosa, Peptídeo recombinante, Vacina