XXI ALAM
Resumo:667-1


Prêmio
667-1Detecção, isolamento e antigenicidade do componente capsular de isolados de Ureaplasma diversum
Autores:Maysa Santos Barbosa (UFBA - Universidade Federal da Bahia) ; Izadora de Souza Rezende (UFBA - Universidade Federal da Bahia) ; Hellen Braga Martins (UFBA - Universidade Federal da Bahia) ; Ewerton Ferraz Andrade (UFBA - Universidade Federal da Bahia) ; Aline Teixeira Amorim (UFBA - Universidade Federal da Bahia) ; Verena Macedo Santos (USP - Universidade de São Paulo) ; Simone Gomes de Souza (UFBA - Universidade Federal da Bahia) ; Guilherme Barreto Campos (USP - Universidade de São Paulo) ; Mariluze Peixoto Cruz (UFBA - Universidade Federal da Bahia) ; Regiane Yatsuda (UFBA - Universidade Federal da Bahia) ; Jorge Timenetsky (USP - Universidade de São Paulo) ; Lucas Miranda Marques (UFBA - Universidade Federal da Bahia / USP - Universidade de São Paulo)

Resumo

As infecções por Ureaplasma diversum, em bovinos, estão associados a diversas patologias, como vulvovaginite granular, endometrite, salpingite, aborto, infertilidade e nascimento prematuro ocasionando um problema que afeta a pecuária e interfere na economia. A presença da cápsula é um dos fatores de virulência que pode contribuir para a manifestação dessas características patogênicas. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a presença da cápsula polissacarídica, isolar, quantificar as principais biomoléculas constituintes e avaliar a imunogenicidade do componente capsular de cepas de U. diversum. Foram utilizadas cepas de U. diversum ATCC sorogrupo A (49782) e isolados de campo de muco vulvovaginal de fêmeas bovinas e de sêmen bovino. Para a avaliação da presença da cápsula, os isolados foram subcultivados em 50mL de meio UB, marcados com vermelho de ruteno e analisados em microscopia eletrônica de transmissão. Todas as cepas e isolados apresentaram, pela primeira vez relatado na literatura, uma camada polissacarídica externa, extendendo-se 11 a 17nm a partir da membrana plasmática. Para os testes seguintes as amostras foram subcultivadas em dois litros de meio UB, centrifugadas e o sedimento foi ressuspendido em 10mL de PBS glicosado. A extração prosseguiu-se pelo método fenol-clorofórmio, pela adição das enzimas DNAase I e II, RNAase, e proteinase K. Com o produto da extração foi realizado eletroforese vertical em gel de poliacrilamida 12% corado por nitrato de prata, dosagem de carboidratos por fenol-ácido sulfúrico e dosagem de proteínas por Bradford. O SDS-PAGE permitiu inferir que havia pouca concentração de proteínas de baixo peso molecular no material extraído. As amostras apresentaram concentrações de carboidratos e proteínas totais de aproximadamente 0,86µg/mL e 3,3µg/mL, respectivamente. E por fim, foi avaliado a imunogenicidade dos componentes capsulares extraídos. Estes foram inoculados em cultura de macrófagos da linhagem J774, o sobrenadante foi coletado e utilizado para dosagem das citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-10, por ELISA. Todas as amostras obtiveram alta expressão das citocinas pró-inflamatórias e baixa expressão de IL-10, reafirmando a ativação dos macrófagos. Com isto, o estudo demonstrou que a cápsula em U. diversum pode possuir papel relevante nas infecções provocadas ao determinar uma resposta imune inflamatória.


Palavras-chave:  cápsula, componentes constituintes, imunogenicidade, Ureaplasma diversum