Resumo

L-asparaginase é um agente antineoplásico utilizado na quimioterapia de leucemia linfoblástica, responsável pela degradação da asparagina em ácido aspártico e amônia. Embora a L-asparaginase seja produzida por inúmeros micro-organismos, todas as asparaginases comercializadas são produzidas por linhagens recombinantes de bactérias como Eschericchia coli e Erwinia chrysanthemi, muitos trabalhos relatam fungos como grandes produtores, estimulando o presente estudo avaliar a produção de L-asparaginase a partir de leveduras. Foram analisadas 21 leveduras como produtoras de L-asparaginase obtidas da região Amazônica, cultivadas em fermentação submersa utilizando meio de crescimento contendo peptona (10 g.L^-1), extrato de levedura (5 g.L^-1), glicose (40 g.L^-1) K2HPO4 (1 g.L^-1) e L-asparagina (10 g.L^-1). A produção de L-asparaginase foi acompanhada em 12 ensaios utilizando design experimental Plackett Burman com 11 diferentes variáveis: glicose, L-asparagina, glutamato, extrato de levedura, peptona e triptona, fosfato de potássio, sulfato de magnésio, tempo de cultivo, pH e temperatura. Para a determinação de proteínas totais foi utilizado o corante Coomassie Brilliant Blue G 250, e a atividade enzimática foi determinada utilizando reagente de Nessler’s®, na qual, a densidade óptica foi mensurada em espectrofotômetro a 405nm, considerando que uma unidade (U) de L-asparaginase é a quantidade de enzima que libera 1 μµm de amônia em 1 minuto a 37°C. Embora todos os ensaios testados terem apresentado produção de asparaginase o máximo produzido (151,58 U.mg^-1) foi observado nas condições fermentativas de 72h a 36°C em pH 8,0, com extrato de levedura a 20 g.L^-1, glicose a 5 g.L^-1, asparagina a 15 g.L^-1 e glutamato a 20 g.L^-1, com 1 g.L^-1 de sulfato de magnésio, e na ausência de fosfato de potássio, triptona e peptona. Para determinar a relação entre as variáveis significantes e a resposta, análise estatística de variância foi realizada com as variáveis independentes. Após análise estatística observou-se influência da glicose, temperatura e tempo na produção da L-asparaginase.